牛初乳中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的分离与纯化

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胰岛素样生长因子(Insulin-like Growth Factors,IGFs)在结构上与胰岛素前体有高度的同源性,具有胰岛素的一些功能和特性,根据分子结构将IGFs划分为IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ两类。到目前为止,研究较多的是IGF-Ⅰ,分子量为7649道尔顿,等电点是8.4。牛初乳是指奶牛分娩后7天内特别是3天内所分泌的乳汁。初乳中不仅含有丰富的营养物质,而且还含有大量的生物活性物质。近些年的研究表明,IGF-Ⅰ除了在组织细胞存在外,还在牛初乳中大量存在,是牛初乳中最重要的促生长因子。本文对牛初乳中IGF-Ⅰ的提取和纯化进行了研究,对分离获取高水平IGF-Ⅰ的前处理条件进行了较为细致的条件优化,包括脱脂乳及乳清的制备,去除IGF-Ⅰ结合蛋白及减压浓缩条件的探索。将所得的IGF-Ⅰ粗提品,进行超滤,并对不同pH值、不同温度条件进行详细优化,再将所得样品采用SephadexG50葡聚糖凝胶柱层析作为分离纯化的手段,并对其分离条件进行了改进。对每一步骤中的粗提物分别用SDS-PAGE电泳检测,以验证提纯效果。每一步骤中IGF-Ⅰ的质量浓度检测均采用放射免疫法测定。本试验获得了一整套从牛初乳中分离纯化IGF-Ⅰ的方法,最终得到分离物中IGF-Ⅰ质量浓度为1915.56ng/ml,约为初乳的114倍,得率为27.23%。本方法为后续工作中采用规模化、高水平生产IGF-Ⅰ提供了实验依据。
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