【摘 要】
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目的心肌细胞凋亡的失衡与急性心肌梗死以及再灌注导致的心肌损伤病理过程关系密切,同时心肌细胞凋亡常常伴随线粒体的形态改变,如线粒体分裂,但目前对此尚未完全研究透彻。Piwi互作RNA（Piwi-interacting RNA,piRNA）作为一类新型非编码小RNA,已被证明在癌症、衰老以及心血管疾病中具有重要的作用,但piRNA在心脏疾病中的作用仍有待充分阐明。预实验结果显示,与假手术（Sham）组
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目的心肌细胞凋亡的失衡与急性心肌梗死以及再灌注导致的心肌损伤病理过程关系密切,同时心肌细胞凋亡常常伴随线粒体的形态改变,如线粒体分裂,但目前对此尚未完全研究透彻。Piwi互作RNA（Piwi-interacting RNA,piRNA）作为一类新型非编码小RNA,已被证明在癌症、衰老以及心血管疾病中具有重要的作用,但piRNA在心脏疾病中的作用仍有待充分阐明。预实验结果显示,与假手术（Sham）组相比缺血再灌注（I/R）损伤组的C57 BL/6J品系小鼠心脏中有多个piRNA表达具有明显的差异性,其中piR-10555表达差异显著且在心脏中特异表达,提示piR-10555可能参与心肌细胞凋亡的调控。因此,为了揭示piR-10555是否能够调控心肌细胞凋亡,我们拟在细胞水平及动物水平研究piR-10555对心肌细胞凋亡的调节功能,为piRNA的临床应用提供理论基础。方法实验以雌雄不分的乳鼠心脏分离出的原代心肌细胞为研究对象,将agomir-piR-10555转染进细胞过表达piR-10555。通过Tunel染色方法检测心肌细胞凋亡情况,通过Mito-Tracker染色观察线粒分裂情况。体外通过H2O2诱导心肌细胞凋亡,将antagomir-piR-10555转染进细胞敲低内源piR-10555表达水平,检测心肌细胞凋亡情况和心肌细胞线粒体分裂情况。利用q RT-PCR检测piR-10555的表达情况。在体内,通过注射腺病毒敲低piR-10555,并进行I/R手术诱导心肌缺血再灌注损伤,通过Tunel染色的方法观察小鼠心肌细胞凋亡的变化。结果1、在C57 BL/6J小鼠的心、肝、脾、肾、胃组织中,piR-10555在心脏中的表达峰度最高;2、利用H2O2分别处理原代心肌细胞0h、6h、12h、24h,检测发现piR-10555的表达水平在处理24h时显著升高;3、在体外,过表达piR-10555,心肌细胞凋亡增加,线粒体分裂增多;敲低piR-10555,H2O2诱导的心肌细胞凋亡减少,线粒体分裂减少;4、在体内,小鼠心肌缺血再灌注损伤模型中,敲低piR-10555后抑制了I/R诱导的心肌细胞凋亡率的升高。结论结果显示细胞水平过表达piR-10555能够促进心肌细胞发生凋亡;敲低内源性piR-10555能够抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡;体内实验证实敲低piR-10555抑制了I/R诱导的心肌细胞凋亡。具体结论如下:1.在原代心肌细胞中,H2O2诱导piR-10555的表达上调,过表达piR-10555促进心肌细胞凋亡以及线粒体分裂;2.在原代心肌细胞中,敲低内源性piR-10555抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡以及线粒体分裂;3.在体内,小鼠心肌缺血再灌注损伤模型中,敲低piR-10555抑制I/R诱导的心肌细胞凋亡。
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