板蓝根多糖免疫佐剂功能及机理研究

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板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatis Indigotica)的干燥根,是我国的传统中药。含有多种活性成分,例如黄酮、多糖、生物碱和木质素。多糖是板蓝根中主要活性物质之一,大量研究表明,板蓝根粗多糖具有免疫调节、抗炎抗菌、抗肿瘤等药理学活性。本研究中以板蓝根多糖IIP-A、IIP-B及进一步分离提纯的亚组分IIP-A-1、IIP-B-1和IIP-B-2为疫苗佐剂,分别与甲型H1N1流感病毒裂解疫苗和重组乙肝表面抗原(HBsAg)配伍后,肌肉注射免疫Balb/c小鼠,通过ELISA法检测抗体水平及亚类,评价多糖对体液免疫的影响,通过MTT法检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖活性,通过流式细胞术测定脾淋巴细胞群及亚群的变化,酶联免疫分析(ELISA)测定细胞因子IFN-γ和IL-4水平。板蓝根多糖配伍H1N1流感病毒裂解疫苗实验结果表明,板蓝根多糖IIP-A-1可显著的提高抗体产生速度,并且促进免疫球蛋白主要类型转变,促使B细胞分泌的抗体由IgM类抗体为主转换成亲和力更高的IgG2a、IgG2b和IgG3亚类;IIP-B-1和IIP-B-2组分也能促进抗体产生,对小鼠IgG2b和IgG3亚类有明显提高作用,但是效果不如IIP-A-1显著。各多糖组分均显著增加CD3~+T细胞、CD8~+T细胞亚群百分率以及CD3~+/CD19~+比值;IIP-A佐剂组与H1N1单独免疫组相比显著增加IFN-γ分泌;免疫小鼠体重及脏器系数结果表明板蓝根多糖对小鼠没有可见的毒副作用;将多糖与抗原分别注射于小鼠不同部位,与无佐剂对照组比较,3种多糖组分对H1N1抗体的产生没有明显影响。板蓝根多糖配伍HBsAg结果表明,初次免疫时IIP-A和IIP-B能促进抗体产生,但是统计学无差异;加强免疫后IIP-A诱导小鼠产生的抗体水平显著高于无佐剂对照组; IgG1、IgG3亚类抗体水平显著升高,并增加IgG2a和IgA亚类水平,效果与铝佐剂组相当;IIP-A和IIP-A-1与无佐剂对照组比较,能增加抗体持续时间,但效果不如铝佐剂组;IIP-B增加ConA诱导的T淋巴细胞增殖和LPS诱导的B淋巴细胞增殖,与无佐剂对照和铝佐剂组相比差异显著;IIP-B组与无佐剂对照组相比能增加CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T亚群及CD8~+T亚群百分率,但水平低于铝佐剂组;与铝佐剂相比显著增加脾淋巴细胞IFN-γ分泌,降低胸腺细胞IL-4水平。板蓝根多糖对正常小鼠免疫功能影响结果表明,多糖自身没有检测到免疫原性;对ConA诱导的T淋巴细胞增殖和LPS诱导的B淋巴细胞增殖无影响;能使CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T细胞亚群、CD8~+T细胞亚群和CD19~+B淋巴细胞百分比显著升高,CD3~+/CD19~+值显著升高,提示能增强细胞免疫功能。IIP-A显著降低脾细胞IFN-γ和胸腺细胞IL-4分泌,IIP-B显著降低脾细胞IFN-γ分泌,增加IL-4分泌。以上研究表明,板蓝根多糖对Balb/c小鼠体液和细胞免疫应答具有促进作用,对正常和免疫小鼠疫细胞因子分泌有双向调节作用,是一种良好的免疫增强剂,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。
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