中药复方JH-07的HPLC指纹图谱及抗肿瘤活性研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leezhenghui
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复方JH-07是我室自行研制的中药复方,由黄连、吴茱萸、藤黄的醇提物按质量比1.5:1.5:1复配而成,经初步药理学试验具有一定抗肿瘤活性。中药质量评价是当前中医药领域的热点问题,也是中药现代化的重要研究课题,其中指纹图谱是公认的解决中药质量控制的方法。本课题选择HPLC指纹图谱分析方法为主,对复方进行质量控制研究;选择体内、外抗肿瘤作用作为评价指标。主要内容如下:采用HPLC法对各药材醇提物中指标性成分进行含量测定,从而起到在源头上控制复方质量的作用。黄连中小檗碱含量为74.5mg·g-1,吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量分别为78.6及46.5mg·g-1,藤黄中藤黄酸含量为26.2 mg·g-1。采用HPLC指纹图谱对复方JH-07的质量进行控制。经过多次摸索,确定洗脱系统:水-乙腈-50mmol·L-1KH2PO4,水溶液(磷酸调PH到3),线性梯度洗脱;检测波长:283nm;柱温:25℃;流速:1.0ml·min-1。建立了复方JH-07指纹图谱分析方法。选出各批次复方JH-07的20个色谱峰作为共有指纹峰,比较了保留时间、峰面积、峰面积百分比及指标性成分含量的一致性。发现这些指纹峰特征性强、系统性好,可以很好的反映复方JH-07质量优劣。生物活性实验部分采用体外、体内抗肿瘤实验方法。体外抗肿瘤实验采用噻唑蓝(MTT)法俭测JH-07对体外培养的人食管癌细胞EC9706,人白血病细胞K562敏感株及耐药株,人成纤维瘤细胞L929,人脑胶质瘤细胞TJ-905的生长抑制作用。体外JH-07可以显著抑制人白血病细胞K562敏感株和耐药株,以及人脑胶质瘤细胞TJ-905的生长,IC50分别为15.40μg·ml-1、9.55μg·mL-1、15.02μg·mL-1。体内JH-07对H22肝癌荷瘤小鼠实体瘤的抑瘤实验采用常规抗肿瘤药物实验方法,用昆明种小白鼠,雌雄各半,设立空白对照组、顺铂(0.005g·kg-1)及3个剂量JH-07给药组,每组10只;比较各组瘤重、肝、脾、胸腺指数,计算抑瘤率。体内JH-07小剂量、中剂量、高剂量组的肿瘤抑制率分别为48.7%、36.5%、46.7%。与对照组相比,P均<0.01。脏器指数及重量与空白对照组相比较差异均无统计学意义(P>0.05),而与阳性对照药顺铂组比较其差异具有统计学意义(P<0.01)。表明JH-07体外、体内对肿瘤细胞及组织均有显著抑制生长活性,是值得深入研究的抗肿瘤新复方。
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