组蛋白去乙酰化酶CgHOS2调控胶孢炭疽菌对橡胶树致病力的分子机制研究

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由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的橡胶树炭疽病害严重制约橡胶产业的发展,其主要通过自然孔口、伤口侵染引起橡胶树发病。表观遗传是指核苷酸序列未发生改变的情况,基因表达发生了可遗传的变化,主要涉及组蛋白修饰、DNA甲基化、染色质重塑等。其中,组蛋白乙酰化能促进基因转录表达而组蛋白去乙酰化能抑制基因转录表达。组蛋白乙酰化修饰在胶孢炭疽菌的致病性及胶孢炭疽菌与橡胶树相互作用过程中的具体功能和潜在作用机制有待深入了解。通过前期工作研究,我们在胶孢炭疽菌中鉴定到三个组蛋白去乙酰化酶基因,其中两个基因在胶孢炭疽菌中一个基因表现出敲除致死的现象,另一个基因敲除后胶孢炭疽菌生理表型无变化,第三个基因命名为CgHOS2,研究结果总结如下:1.生物信息学分析结果显示,CgHOS2含有一个组蛋白去乙酰化结构和一个卷曲螺旋区域。2.通过同源重组原理构建敲除CgHOS2基因的ΔCgHOS2菌株及互补菌株Res-ΔCgHOS2。3.对ΔCgHOS2、Res-ΔCgHOS2和WT菌株进行表型分析,发现ΔCgHOS2菌株在PDA上生长缓慢,产孢量上升;互补株Res-ΔCgHOS2生长表型完全恢复。4.与WT菌株相比,ΔCgHOS2菌株中总蛋白乙酰化水平升高,乙酰辅酶A含量下降。5.通过对ΔCgHOS2和WT菌株黑色素测定发现ΔCgHOS2菌株中黑色素含量下降,说明黑色素合成受阻。通过qPCR检测发现黑色素合成相关基因CMR1、AYG1、ARP1、ARP2-1、ARP2-2、AIB1、TYR1、TYR2基因的表达量与WT菌株中的表达量相比有显著差异且基因表达量下降。6.对ΔCgHOS2菌株进行致病性分析,发现其致病力减弱,菌丝机械穿透力受损。7.ΔCgHOS2菌株抗氧化能力下降。8.在ΔCgHOS2菌株过表达角质酶基因Cutinase1和Cutinase2后菌丝生长速度变快,机械穿透力增强,但致病力无显著变化。综上所述,本研究成功克隆了胶孢炭疽菌中的组蛋白去乙酰化酶基因CgHOS2,发现其参与调控胶孢炭疽菌的生长及产孢、黑色素合成、乙酰化水平、乙酰辅酶A含量、抗氧化能力和对橡胶树的致病力等。本研究加深了人们对组蛋白去乙酰化酶调控胶孢炭疽菌致病机制的理解。
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