【摘 要】
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背景:小细胞肺癌（SCLC）是发生于呼吸系统的严重致命性亚型肺部肿瘤,侵袭程度高,倾向于早期发生转移和复发,导致患者在初始治疗阶段出现药物抗性,同时可选择的治疗方案较少,患者的预后状况不容乐观。肿瘤的发生及进展是错综复杂的因素综合作用的结果,常伴随细胞内分子的异常改变。其中,核有丝分裂器蛋白（NuMA）是细胞内一个关键的结构枢纽蛋白,通过自我组装成高度有序的结构,维持纺锤体结构的稳定,并参与细胞核
【基金项目】
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国家自然科学基金; 南昌大学研究生创新专项基金
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背景:小细胞肺癌（SCLC）是发生于呼吸系统的严重致命性亚型肺部肿瘤,侵袭程度高,倾向于早期发生转移和复发,导致患者在初始治疗阶段出现药物抗性,同时可选择的治疗方案较少,患者的预后状况不容乐观。肿瘤的发生及进展是错综复杂的因素综合作用的结果,常伴随细胞内分子的异常改变。其中,核有丝分裂器蛋白（NuMA）是细胞内一个关键的结构枢纽蛋白,通过自我组装成高度有序的结构,维持纺锤体结构的稳定,并参与细胞核的形成,通过与Leu-Gly-Asn（LGN）蛋白家族和dynein-dynactin结合形成dynein-dynactin-NuMA复合物参与细胞的有丝分裂过程。NuMA异常表达时,可以促进细胞形成多级纺锤体,使得染色体结构和分配发生紊乱,导致细胞不均等分裂或产生多个细胞核,从而使细胞发生死亡或诱导细胞恶性增殖,成为细胞癌变的重要一环。细胞分裂异常是肿瘤的主要呈现方式,因此,NuMA可能是肿瘤发病机制中的重要分子之一。目的:本研究旨在通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）确定NuMA在SCLC细胞系中的表达水平,构建sh-NuMA慢病毒载体以敲降NuMA基因,探索NuMA表达降低后,对SCLC NCI-H446细胞增殖、克隆、迁移、侵袭和凋亡等恶性生物学行为的调控作用,为NuMA在SCLC的形成和进展中所起的作用提供新的理论依据。方法:（1）利用qRT-PCR检测SCLC细胞系内NuMA mRNA的扩增情况;（2）利用Western Blot检测SCLC细胞系内NuMA蛋白的表达水平;（3）利用qRT-PCR和Western Blot验证NuMA的敲降效果,判断NuMA敲降的实验细胞模型是否构建成功;（4）通过sh-NuMA慢病毒转染NCI-H446细胞,观察敲降NuMA对细胞形态的影响;（5）实施CCK8增殖活力实验分析敲降NuMA对NCI-H446细胞体外增殖能力的影响;（6）通过克隆形成实验观察敲降NuMA对NCI-H446细胞体外克隆成团能力的影响;（7）利用划痕愈合实验和Transwell迁移实验分析敲降NuMA对NCI-H446细胞迁移能力的影响;（8）通过Matrigel胶Transwell侵袭实验观察敲降NuMA对NCI-H446细胞侵袭能力的影响;（9）采取Annexin V-FITC/PI法验证敲降NuMA后,NCI-H446细胞凋亡的改变情况。结果:（1）根据qRT-PCR和Western Blot实验结果发现,NuMA mRNA和蛋白的水平在NCI-H446和NCI-H69细胞中升高;（2）用sh-NuMA慢病毒转染NCI-H446细胞后,未见细胞形态的显著改变;（3）NuMA敲降后,实验组NCI-H446细胞的增殖和集落形成能力均低于sh-NC对照组,说明增殖能力受到显著抑制（P＜0.001）;（4）经过划痕愈合与Transwell迁移实验发现,敲降NuMA后,NCI-H446细胞在横向（P＜0.01）和纵向（P＜0.05）的迁移能力均受到了影响;（5）Matrigel胶侵袭实验结果显示,与sh-NC对照组细胞相比,NuMA敲降后实验组NCI-H446细胞的侵袭能力显著受到抑制（P＜0.001）;（6）通过细胞凋亡实验发现NuMA敲降后,实验组NCI-H446的凋亡率较sh-NC对照组细胞高,差异明显有统计学意义（P＜0.01）。结论:（1）本研究证实了NuMA在SCLC NCI-H446和NCI-H69细胞中高表达;（2）本研究从细胞水平探索了NuMA敲降后对SCLC NCI-H446细胞恶性生物学行为的影响。NuMA敲降后可显著抑制NCI-H446细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭行为,且诱导细胞凋亡,为SCLC的发病机制提供新的研究渠道。
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