天麻来源于兰科植物天麻Gastrodia elata Blume的干燥块茎,始载于《神农本草经》,被列为上品。天麻的化学成分主要包括酚类、有机酸类以及多糖等,具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络的功效。随着天麻栽培技术的不断发展,天麻的种植区域不断扩大。目前,陕西、四川、贵州、云南等地是天麻的主要产区,此外,在甘肃、江苏、安徽、浙江、江西、湖北、湖南等地亦有分布。天麻作为一种名贵药材,其质量问题关系到用药的安全性和有效性。目前,对天麻质量的研究有很多,但是存在产地不完善、样品量不足的问题,并且未有对其品质进行系统性评价的研究。因此,本文从陕西、云南、贵州、安徽、浙江和湖北六个主产区收集得到了79个批次的天麻样品,结合其外观性状和内在品质研究,对不同产地天麻药材的品质进行了系统性评价。此外,标准饮片也是目前研究的热点,为了提高天麻饮片的质量,本文对天麻饮片的炮制工艺以及天麻标准饮片的均匀化制备技术进行了研究。同时,在对天麻小分子的研究基础上,从天麻中得到了大分子的粗多糖和纯化多糖,并对二者的基本性质和免疫活性进行了研究,以促进天麻资源的有效利用。本文的研究内容主要包括以下几个方面:1.六主产区天麻质量的基本鉴别与检测本文以六个主产区收集到的79个批次的天麻药材为研究对象,对其进行了外观性状、显微和薄层鉴别,结果发现各批次的天麻药材均符合药典项下规定的天麻的性状特征和显微特征。薄层色谱结果显示,供试品色谱中,在与天麻对照药材色谱的相应位置上,显示出相同数量和颜色的斑点;在与天麻素对照品或者对羟基苯甲醇对照品色谱的相应位置上,显示出相同颜色的斑点。水分和浸出物检测结果显示79个批次的天麻样品的水分含量在10.55%-14.38%之间,浸出物含量在15.21%-29.06%之间,两种指标的检测结果均符合药典的要求。此外,测定了各批次天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的总含量。根据2015年版《中国药典》中天麻项下的含量测定要求天麻素和对羟基苯甲醇的总含量不得少于0.25%。由测定结果可知,天麻素的含量在0.15%-2.01%之间,对羟基苯甲醇含量在0.01%-0.26%之间,这两种化合物的总含量在0.25%-2.02%之间。尤其是安徽省的样品中天麻素含量最高,对羟基苯甲醇含量最低。含量测定结果显示79个批次的天麻样品中天麻素和对羟基苯甲醇的总含量均符合2015年版《中国药典》的要求。以上鉴别和检测结果表明收集到的79个批次的天麻样品均合格。2.六主产区天麻的多成分定量和指纹图谱研究对收集到的六个产地共79个批次的天麻药材采用HPLC-PDA法对其所含有的六种主要成分（天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B和巴利森苷C）进行多成分定量研究。结果显示安徽、贵州、云南、湖北、浙江、陕西这六个产地的天麻中六种有效成分的总含量分别为1.67-2.08%、1.77-2.50%、1.38-2.23%、2.02-3.15%、2.10-2.65%和1.18-2.16%。湖北和浙江产地天麻中六种成分的平均含量较高,其次是贵州,然后是安徽、云南和陕西。其中,湖北、浙江和贵州省的天麻中六种成分的平均含量均大于2.00%,而安徽、云南和陕西省的天麻中六种成分的平均含量均小于2.00%。各批次天麻药材中天麻素和对羟基苯甲醇的总含量在0.32-1.46%之间,说明这两种活性成分的含量均高于药典要求。此外,安徽天麻中天麻素和腺苷含量明显高于其他产地,而对羟基苯甲醇和巴利森苷类的含量明显低于其他产地,这与药典方法得到的含量测定结果一致。聚类分析将79批天麻分为三组,第一组主要是安徽产地的天麻,6种成分的总含量在1.67-2.41%之间。第二组包括云南和陕西产地的天麻,6种成分的总含量在1.19-2.13%之间。第三组主要由贵州、浙江、湖北产地的天麻组成,6种成分的总含量在2.38-3.03%之间。通过主成分分析发现所有数据被简化为两个主成分,两个主成分的总贡献率为81.078%。其中,主成分1的贡献率为59.056%,主要包括巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C和对羟基苯甲醇;主成分2的贡献率为22.022%,主要为天麻素和腺苷。此外,六个产地的天麻被分为三组,第一组为位于主成分2正半轴上的具有较高天麻素和腺苷含量的安徽产地的天麻。第二组为湖北、浙江和贵州产地的天麻,主要位于主成分1的正半轴上,表明这三个产地天麻中的巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C和对羟基苯甲醇含量较高。第三组主要为陕西和云南产地的天麻,说明这两个产地的天麻中6种活性成分的含量较低。此外,根据六个产地天麻的平均得分可知,湖北产地天麻的得分最高（1.63分）,其次是浙江、安徽和贵州产地（分别为0.98、0.93和0.46分）,云南和陕西产地得分最低（分别为-0.36和-1.58分）。主成分分析结果与聚类分析一致,两种分析方法所得结果均说明产地对天麻质量具有一定的影响。除了多成分定量分析外,利用优化得到的HPLC-PDA条件建立了不同产地和不同等级天麻的色谱指纹图谱。相似度结果显示安徽（0.921-0.997）、贵州（0.955-0.996）和浙江（0.930-0.989）的天麻相似度均大于0.900。而产于湖北（2个批次）、陕西（5个批次）、云南（1个批次）等省的天麻的相似性度在0.821和0.899之间,其他批次的相似性度都在0.900以上。总体来说,同一产地不同批次的天麻具有很高的相似性,表明来自同一产地的各批次天麻的质量比较稳定。从直观上看,不同产地同一等级的各批次天麻的色谱指纹图谱是相似的,说明其所含化何物的类型相似。但是相似度结果显示部分批次的相似度小于0.800,说明同一等级中不同批次天麻的质量存在一定的差异。天麻的化学成分复杂,很难检测到天麻中所有成分的含量。因此,同一等级中不同批次之间的差异可能是由于化合物的含量不同造成的。对6个产地18个批次的一级天麻进行了抗氧化及α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究。含量测定结果显示这18批天麻中天麻素、巴利森苷A和巴利森苷B的含量较高,巴利森苷C、对羟基苯甲醇和腺苷含量次之。而安徽样品中天麻素和腺苷含量最高,对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C含量最低。DPPH自由基清除活性和FRAP结果表明,贵州天麻的DPPH自由基清除能力最高,IC₅₀值在0.743-0.860 mg/m L之间,其次是云南和陕西产地的天麻。浙江、湖北和安徽省的天麻显示出较低的DPPH自由基清除活性。此外,贵州天麻的FRAP活性最高（5.333-5.741 mg/g）,湖北天麻的FRAP活性最低（2.560 mg/g）。α-葡萄糖苷酶抑制活性结果表明天麻的IC₅₀值在1.595-33.491 mg/m L之间,安徽天麻的α-葡萄糖苷酶抑制活性最高,其IC₅₀值均小于2.187 mg/m L;云南和贵州产地的天麻也具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制能力,IC₅₀值在7.620-18.064 mg/m L之间;陕西天麻对α-葡萄糖苷酶的抑制作用最弱,IC₅₀值为33.491mg/m L。通过相关性分析发现DPPH自由基清除活性与巴利森苷B（r=0.221）和巴利森苷C（r=0.149）的含量呈弱相关,而与对羟基苯甲醇的含量（r=0.551）有强相关性;FRAP和对羟基苯甲醇的相关性较弱（r=0.069）。α-葡萄糖苷酶抑制活性与天麻素含量的呈现出强相关性（r=0.795）。相关性分析结果表明对羟基苯甲醇是抗氧化的主要活性成分,而天麻素是抑制α-葡萄糖苷酶活性的主要成分。因此,贵州、云南和陕西天麻中对羟基苯甲醇含量较高更适合用作抗氧化剂,安徽天麻中天麻素含量较高可用作降血糖药物。3.基于外观性状和内在品质建立天麻的等级质量标准在3个等级18个批次的天麻药材中选取外观性状符合《七十六种药材商品规格标准》要求的样品作为研究对象,分析了不同等级天麻的外观性状（颜色、弯曲度、收缩度）与水分、浸出物和6种主要成分的含量之间的相关性。其中,水分含量在10.53%-13.17%之间;浸出物含量在16.86-24.23%之间;一级、二级和三级天麻所含六种化合物总含量分别为1.74-2.62%、1.72-2.45%和1.33-2.52%。结果发现天麻的外观性状与水分、浸出物和6种主要成分的含量之间无相关性,因此仅依靠外观性状对天麻进行等级划分是不合理的。在结合外观性状和内在品质的基础上,建立了天麻的等级质量标准。一级天麻要求每公斤在24支以内,所含浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇总含量以及6种成分总含量分别大于17.0%、0.30%、和1.70%;二级天麻要求每公斤在42支以内,所含浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇总含量以及6种成分总含量同一级;三级天麻要求每公斤在90支以内,所含浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇总含量符合药典要求即可,对6种成分总含量不做要求;四级天麻要求每公斤大于90支,所含浸出物、天麻素和对羟基苯甲醇重量以及6种成分总含量同三级。4.天麻炮制及其标准饮片的均匀化工艺研究对天麻的炮制工艺（蒸切和润切）以及均匀化工艺进行了条件优化。以天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的总含量以及总多糖含量为指标,对影响天麻饮片质量的三个因素,即浸泡时间、闷润时间/蒸制时间和干燥温度进行了考察,并通过正交试验得到了最佳的润切工艺为将天麻浸泡54 h,闷润22 h,切片后于60°C烘干;最佳的蒸制工艺为将天麻浸泡3 h,蒸制3 h,切片后于40°C烘干。此外,对不同粒度的天麻饮片进行考察,优选出通过2号筛的粉末作为候选标准饮片。然后对单次粉碎时间、粉碎次数以及投料量占粉碎机总体积的比例进行了考察,以出粉率、天麻素和对羟基苯甲醇总含量为指标,确定了最佳的均匀化工艺制备技术为单次粉碎时间为15s,粉碎3次,投料量占粉碎机总体积的3/4。然后对最佳炮制工艺和均匀化制备工艺进行验证,结果显示得到的最优工艺的参数合理,工艺稳定可行。本研究推动解决了药材有对照药材,饮片无对照饮片的问题,为天麻饮片质量控制和提升提供了一个更有效并且更具专属性的参考依据。5.天麻多糖的理化性质及其免疫活性研究多糖是一种大分子的天然聚合物,广泛存在于植物、动物、真菌、酵母、藻类和地衣中。多糖具有包括免疫调节、抗凝、抗炎等多种药理作用。植物多糖由于毒性相对较低,副作用最小,其免疫调节作用已引起人们的广泛关注,是新型免疫调节剂的理想候选。多糖是天麻中含量丰富的化学成分之一,但是目前对于天麻的研究多集中在小分子方面,对天麻多糖免疫调节作用的研究仍然有限。本文从天麻中提取得到了天麻粗多糖和纯化多糖,并对它们的基本性质和免疫活性进行了研究。结果发现这两种多糖均具有免疫调节活性,对RAW264.7细胞无毒性,且纯化多糖的免疫活性比粗多糖的好。以上结果表明,天麻多糖可作为相关产品的免疫佐剂。综上所述,本文对六个产地79个批次的天麻的品质进行了系统性评价,进而建立了一个更加全面的天麻等级质量标准用以控制天麻药材的质量。对天麻标准饮片的研究推动解决了药材有对照药材,饮片无对照饮片的问题,为中药标准饮片的研究提供了参考。同时,对天麻多糖的研究可促进其在食品和药品等相关领域的发展。