【摘 要】
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蚂蟥（Whitmania paigra Whitman）,又名宽体金线蛭,其干燥全体为中国药典（2015）中药材水蛭,具有破血通经,逐淤散结的功效。蚂蟥为同步性雌雄同体动物,精巢先于卵巢发育,精卵有序发育同步成熟。生殖细胞的增殖、形成和成熟主要与精（卵）巢中雄、雌激素的参与有关,甲基睾酮（MT）作为一种重要的雄性激素,不仅影响性腺发育,还具有促进动物生长的功能。因此本实验拟在蚂蟥精巢增殖期（卵巢形
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81673538、81473306）；
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蚂蟥（Whitmania paigra Whitman）,又名宽体金线蛭,其干燥全体为中国药典（2015）中药材水蛭,具有破血通经,逐淤散结的功效。蚂蟥为同步性雌雄同体动物,精巢先于卵巢发育,精卵有序发育同步成熟。生殖细胞的增殖、形成和成熟主要与精（卵）巢中雄、雌激素的参与有关,甲基睾酮（MT）作为一种重要的雄性激素,不仅影响性腺发育,还具有促进动物生长的功能。因此本实验拟在蚂蟥精巢增殖期（卵巢形成期）、精巢休眠期（卵巢生长期）两个时期的养殖水体中添加不同浓度甲基睾酮（MT）,从组织、生理、分子层面研究外源MT对蚂蟥生长和性腺发育的影响,结果可为蚂蟥生殖发育机理的研究提供理论依据,同时可为蚂蟥人工养殖提供指导。研究结果如下:（1）研究外源MT对不同时期蚂蟥生长、性腺发育的影响。用0.1μg·L-1、1.0μg·L-1、10.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1、150.0μg·L-1共5个浓度MT对1.5月龄和5.5月龄蚂蟥分别进行水浴处理6周,同时对部分5.5月龄MT处理6周的蚂蟥进行60天自然冬眠,采用称重法测定这三个时期蚂蟥体重、性腺指数和内在品质;采用组织切片和HE染色技术,观察蚂蟥精卵细胞的发育。结果表明,外源MT在0.1～150.0 μg·L-1时能不同程度促进蚂蟥生长和性腺发育,其促进程度随MT浓度的升高呈先升高后降低趋势。其中,1.5月龄蚂蟥添加MT100.0μg·L-1时特定生长率最高,10.0 μg·L-1时性腺指数最高;5.5月龄蚂蟥添加MT6 10.0μg·L-1时特定生长率最高,100.0 μg·L-1时性腺指数最高;自然越冬后蚂蟥,MT100.0μg·L-1体重时最高,10.0 μg·L-1时雄性腺指数最高,1.0 μg·L-1时雌性腺指数最高,药材品质均符合《中国药典》（2015年版）标准,抗凝血酶活性均高于对照组。当外源MT浓度升高至10.0 μg·L-1时3月龄蚂蟥精巢中开始提前出现初级、次级精母细胞,卵巢内出现卵原细胞;MT为100.0 μg·L-1时,7月龄和9月龄性腺内精母细胞、精细胞、卵母细胞数量显著高于其他浓度和未添加组。（2）研究外源MT对不同时期蚂蟥内源性类固醇激素的影响。结果表明,1.5月龄蚂蟥添加MT6周后,内源睾酮（T）、雌三醇（E3）和黄体酮（P）随外源MT浓度的升高呈先升高再降低趋势,其中T、E3和P分别在浓度为100.0μg·L-1、1.0 μg·L-1.0μg·L-1时最高（P＜0.05）;甲基睾酮（MT）、雌酮（E1）与外源MT浓度呈正相关。5.5月龄蚂蟥添加MT6周后,内源T、E1、E3与外源MT浓度呈正相关;MT和P随外源MT浓度升高呈先升高再降低趋势,100.0 μg·L-1时最高（P＜0.05）。自然越冬蚂蟥各激素均呈先升高再降低趋势,T、MT、P在100.0μg·L-1时最高,E1在1.0μg·L-1时最高、E3在10.0 μg·L-1时最高。经外源MT处理后内源T/E3、T/E1均低于对照组。（3）研究外源MT对不同时期蚂蟥内源性类固醇激素相关基因表达的影响。结果表明:随外源MT浓度升高,生长激素基因（GH）、胰岛素样生长因子-1基因（IGF-1）、芳香化酶α（CYP19α）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）和FOXL2基因均呈先升高后降低趋势,基本在浓度10.0～100.0μg·L-1范围内上调显著（p＜0.05）;SRY基因在雄性腺中上调显著（p＜0.05）,雌性腺中表达不显著（p＞0.05）;WNT4基因在雄性腺中表达不显著（p＞0.05）,在雌性腺中上调显著（p＜0.05）。在雄性腺内,随外源MT浓度升高,SRY/WNT4均高于CK组并呈先升高再降低趋势,处理1.5和5.5月龄蚂蟥在10 μg·L-1时最高,分别为2.06和4.29,自然越冬蚂蟥在100μg·L-1时最高,为2.84;在雌性腺内,随外源MT浓度升高,SRY/WNT4均低于CK组并呈先降低再升高趋势,处理1.5和5.5月龄蚂蟥在浓度为10μg·L-1时最低,分别为0.15和0.32,自然越冬蚂蟥在浓度为100 μg·L-1时最低,为0.25。
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