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酞菁是一类在结构上与卟啉、叶绿素很相似的化合物。由于其合成方法简单,对光、热的稳定性好,在染料、颜料、光电材料、催化剂、光动力学疗法、荧光分析等方面得到愈来愈广泛的应用。本文在前人研究的基础上,继续开拓酞菁化合物在荧光分析中的应用。同时,也对其散射光在生物大分子测定中的应用作了一些探讨。全文共分五章。 第一章首先介绍了酞菁化合物的结构、性质和应用,着重介绍了它在荧光分析中的应用。同时也结合本文研究所涉及的领域,对辣根过氧化物酶(HRP)及其模拟酶的荧光底物的发展现状、反相胶束介质中辣根过氧化物酶的研究状况作了一些评述。 第二章研究了四氨基铝酞菁作为辣根过氧化物酶及其模拟酶的新型红区荧光底物的可行性及分析应用。首先考察了以四氨基铝酞菁为底物时辣根过氧化物酶的催化活性。实验结果表明在催化四氨基铝酞菁与过氧化氢的荧光反应中,辣根过氧化物酶表现出显著的催化活性。其次,将以四氨基铝酞菁作为供氢底物的酶催化反应体系用于痕量过氧化氢的测定。所建立的方法灵敏度高、检测限低,且因荧光激发与发射均位于红区(610/678nm),可以较好地避开背景荧光和散射光的干扰。将该体系用于人血清中葡萄糖含量和雨水中过氧化氢含量的测定,结果令人满意。最后将四氨基铝酞菁这一红区荧光底物用于HRP标记的酶联吸附免疫分析。首先考察了以四氨基铝酞菁为底物的α-甲胎蛋白(α-AFT)的竞争型酶联荧光免疫分析法。先以HRP标记α-AFT抗原,利用α-AFT与α-AFT-HRP对抗体的竞争型免疫反应,通过一步免疫反应后,再与四氨基铝酞菁-过氧化氢的荧光反应偶合,建立了α-甲胎蛋白的酶联荧光免疫分析法。该法用于测定结肠癌病人血清中α-甲胎蛋白的含量,结果令人满意。其次,研究了以四氨基铝酞菁为底物的乙肝表面抗原(HbsAg)的夹心型酶联荧光免疫分析法。首先用抗HbsAg抗体包被微孔板,加入的HbsAg与包被的抗体发生特异性结合,然后再加入HRP标记的抗体与HbsAg进行特异性反应,经过两步免疫反应后,固相上结合的HRP通过与四氨基铝酞菁-过氧化氢的荧光反应偶合来加以测定,从而测得加入的HbsAg抗原的量。并将该法用于阴性血清和乙肝病毒感染者血清中HbsAg水平的测定。 第三章研究了反相胶束介质中,辣根过氧化物酶模拟酶四磺基铁酞菁(FeTSPc)的催化行为。反相胶束是两亲分子溶解在有机相及少量水中自发形成的热力学性质稳定、光学透明的球形聚集体。以其独特的溶解能力、自组装性和相对有序的结构等特点,可为酶催化反应提供模拟生物体内酶催化的微环境。因而在酶法分析中,它不仅能使酶表现出高的活性,甚至使酶呈现“超级活性”。首先考察了AOT/水/环己烷阴离子反相胶束介质中FeTSPc催化过氧化氢氧化L-酪氨酸荧光反应的催化活性。结果表明,AOT/环己烷反相胶束介质不仅能提高FeTSPc的催化活性(其催化活性约是水溶液中的8倍),而且对其催化氧化产物二-酪氨酸的荧光亦具有一定的增敏作用。并进一步研究了水含量、pH、温度、表面活性剂浓度等对催化反应的影响。其次探讨了CTAB/正庚烷-正戊醇/水阳离子反相胶束介质中FeTSPc催化过氧化氢氧化L一酪氨酸荧光反应的催化反应特性。结果表明,FeTSPc在该介质中呈现出较高的催化活性,与相同条件下水相中的催化氧化反应相比较,其催化活性提高了近15倍。 第四章探讨了离子缔合作用在核酸测定中的应用。本章共分为两部分。第一部分将爱尔新蓝SGX与阴离于七次甲基花育染料的离子缔合作用应用于核酸的定量,建立了核酸测定的新方法,并探索了其机理。该法具有简便、快速、灵敏的特点,且发射波长在近红外区(795run),可有效避免生物样品的背景干扰。对盆栽琼棕 DNA的测定表明了本法的实用性。 第H部分将爱尔新蓝SGX和模拟酶FeTSPc催化的荧光反应相结合,用于核酸的定量测定。当爱尔新蓝SGX加人到FeTSPc一过氧化氢一对羟基苯乙酸的反应体系中时,由于爱尔新蓝SGX和FeTSPC的离子缔合作用导致FeTSPC的催化活性降低,表现为体系的荧光强度降低。当痕量核酸存在时,由于核酸和爱尔新蓝SGX之间强的相互作用,削弱了爱尔新蓝SGX和FeTSPc的离子缔合作用,导致FeTSPc的催化活性恢复,表现为体系的荧光强度增大。借助于酶的高效放大作用,用此法测定核酸可达到较高的灵敏度。 第五章探讨了酞青的共振光散射在生物大分子测定中的应用。首先研究了四磺基铝酞育共振光散射在血清总蛋白测定中的应用。四磺基铝酞育在2500~750刀 urn之间有弱的共振光散射,在酸度合适的介质中(如pH-3刀)中,蛋白能使其413.0 urn处的共振散射峰显著增强,且增强程度与蛋白浓度呈良好的线性关系。据此,建立了血清中总蛋白的共振光散射增强的分析有法。该法灵敏度高、检测限低、而且操作简单。其次探讨了四氨基铝酞警共振光散射在痕量核酸测定中的应用。我们观察到,四氨基铝酞奇在 300.0—800,0 urn之间有弱的共振光散射,痕量核酸的存在能使其400 urn处的共振散射峰显著增强,增强的程度与核酸浓度之间呈良好的线性关系。据此,建立了核酸定量测定的高灵