过表达IL-12诱导单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tshanyf
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目的:探讨过表达IL-12能否诱导单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化,以及对其形态学和吞噬功能的影响。方法:用重组人源性IL-12腺病毒(Ad-IL-12)感染THP-1人急性单核白血病细胞,构建过表达IL-12的单核系肿瘤细胞模型。实验根据细胞处理方式的不同,分为4组:空白组(THP-1细胞)、空载组(感染空载病毒Ad-GFP的THP-1细胞)、IL-12组(感染Ad-IL-12的THP-1细胞)和PMA阳性对照组(320nmol/L PMA处理THP-1细胞24h)。利用RT-PCR、Western Blot和ELISA技术在mRNA和蛋白水平检测IL-12细胞因子以及巨噬细胞表面分化标志CD68和CD11b的表达;利用吉姆萨染色技术观察细胞形态学变化,FITC-葡聚糖法检测细胞的吞噬功能。结果:成功构建过表达IL-12的单核系肿瘤细胞模型。表面分化标志检测分析发现:与空白和空载组相比,IL-12组CD68的mRNA和蛋白表达量均明显升高(P<0.05);而与空白组比较,IL-12组CD11b的mRNA和蛋白表达量升高不明显(P>0.05),但其72h的蛋白表达量明显高于空载组(P<0.05);PMA阳性对照组CD68和CD11b的表达水平均显著高于其他3组(P <0.05)。细胞形态学变化观察也证实,IL-12组的THP-1细胞界限不明显,散在细胞增多,可见附壁现象;细胞多呈圆形或不规则圆形,偶见毛刺样突起;核仁模糊或消失,部分细胞核染色质呈条索状浓集,与PMA阳性对照组细胞形态学变化类似。比较各处理组细胞培养72h后的吞噬功能,IL-12组THP-1细胞的吞噬率(36±1.2)%高于空载组(28±1.5)%和空白组(15±3.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达IL-12可以诱导单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化,并伴有形态和吞噬功能的改变。
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