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重金属是生物体必需的元素,然而过高的浓度会对有机体产生毒性。在真核和细菌中通过各种机制达到对重金属的抗性。铜转运蛋白P型ATP酶在真核生物中广泛存在,在胞内起着转运铜的作用,以达到对铜的抗性。
本文根据已报道的与铜转运P型ATP酶同源的氨基酸序列,设计简并引物,在丝状真菌PenicilliumjanthinillumGXCR中扩增得到与铜转运P型ATP酶基因同源的部分序列。构建了该基因RNA干扰表达载体pCPXBn-ihp1,采用PEG/CacI2介导的方法转化GXCR原生质体,经过PCR检测、Southern杂交分析证实获得三个干扰突变体,对它们进行实时荧光定量PCR分析表明铜转运P型ATP酶基因表达水平降低,分别是野生型的24.92﹪、40.23﹪和32.89﹪。对突变体进行抗铜水平检测发现抗Cu2+能力与野生型对照有下降,表明铜转运P型ATP酶基因在丝状真菌微紫青霉菌PenicilliumjanthinillumGXCR的抗铜能力上起一定作用。