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摘要：表面等离子体激元共振(Surface plasmon resonance, SPR)是一种物理光学现象,能通过检测芯片表面折射率或厚度变化来研究芯片表面分子间的相互作用过程。SPR技术具有实时、免标记、灵敏度高等优点,广泛用于蛋白-蛋白、抗原-抗体、受体-配体以及小分子化合物间相互作用的研究。三聚氰胺(Melamine, C3H6N6)是一种非法加入奶制品中的小分子化合物。它是一种富氮化合物,含氮量高达66%,添加三聚氰胺的食品或牛奶中氮含量会显著提高。长期摄入三聚氰胺会对人体的泌尿生殖系统造成损害,因此,对三聚氰胺快速、可靠的检测对判断牛奶等的污染情况具有重要意义。针对SPR技术不易直接检测低浓度小分子的特性,开发出两种通过信号放大检测三聚氰胺的方法。该方法简单、快速、成本低,为牛奶中三聚氰胺的测定提供了新的技术支持。具体内容如下：1、开发了基于免疫竞争反应检测三聚氰胺的方法。首先在羧甲基葡聚糖修饰的芯片表面引入三聚氰胺衍生物(NH2-melamine或BSA-melamine),随后流动注射待测三聚氰胺与一定浓度的三聚氰胺单克隆抗体的混合溶液。基于溶液中三聚氰胺与芯片表面固定的三聚氰胺衍生物和溶液中一定浓度的三聚氰胺单克隆抗体之间的竞争反应,通过检测芯片表面结合的抗体所产生的SPR信号来实现溶液中三聚氰胺的定量分析。随着溶液中待测三聚氰胺浓度的增大,SPR信号随之降低。通过流动注射NaOH溶液可实现芯片的再生,从而大大提高了样品分析通量。在消除非特异性吸附方面,BSA-melamine修饰的芯片要优于NH2-melamine修饰的芯片。该方法有望用于牛奶中三聚氰胺的测定。2、基于三聚氰胺与胸腺嘧啶(Thymine)的特异性结合性能,开发了DNA修饰的SPR芯片来检测三聚氰胺的方法。首先在羧甲基葡聚糖修饰的芯片表面引入探针DNA (NH2-A15),随后流动注射待测三聚氰胺与一定浓度的靶点DNA (T15-biotin)以及链霉亲和素(Streptavidin, SA)的混合溶液。由于溶液中三聚氰胺与胸腺嘧啶(Thymine)的结合导致T15-biotin-SA复合物结合到芯片表面的量发生变化,通过检测相应的SPR信号来实现溶液中三聚氰胺的定量分析。SPR信号随着溶液中待测三聚氰胺浓度的增大而降低。该方法对三聚氰胺检测的线性范围为0.317-31.7nM与31.7-634nM。