绵羊MYOZ2和MYOZ3基因的克隆及在凉山半细毛羊组织的时空表达

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MYOZ2, MYOZ3属于MYOZS大家族成员,它们是一种肌肉组织特异性表达蛋白,主要在骨骼肌和心肌中发挥重要作用。并且可以激活多种肌肉发生相关基因的表达。同时MYOZ2和MYOZS基因可能在肌纤维的分化和发育或心肌疾病过程中有重要作用。为了研究凉山半细毛羊MYOZ2与MYOZS基因结构及其出生后组织时空表达情况,依据GenBank中人、牛、鼠MYOZ2与MYOZS基因序列保守区域设计引物,扩增其编码序列,然后根据所克隆出的基因序列设计引物,应用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析其在凉山半细毛羊的组织时相相对表达量。实验克隆出MYOZ2基因全编码区长度为951bp,编码264个氨基酸,与人、牛、小鼠的同源性分别为90.27%、97.99%、87.58%。MYOZ3基因全编码区长度为838bp,编码244个氨基酸,与人、牛、小鼠的同源性分别为79.30%、94.27%、72.40%。结果表明MYOZ2基因与MYOZS基因在物种进化过程中比较保守,MYOZ2和MYOZS蛋白都有3个结构区域,含有两个α螺旋区域,中间是一个富含丰富的Gly区域,同源性比对显示两者的相对保守的区域主要集中在N-端和C-端,变异区域集中出现在MYOZS中间区域。两个基因都没有发现信号肽以及跨膜结构,而其磷酸化位点包含许多的Ser残基,基因的二级结构以无卷曲为主,其次是α-螺旋,β-折叠较少。另外其疏水结构分析得MYOZ2有7、7、4个氨基酸的疏水区域,而MYOZS有9、6、1个氨基酸的疏水区域。应用QRT-PCR技术对凉山半细毛羊MYOZ2、MYOZ3基因在生长时期的时空表达进行研究。随机选择15d、60d、105d、160d、195d、240d六个时期,每个时期凉山半细毛羊三只,采集背肌、肝脏、心脏、大脑、皮肤五个组织进行研究。研究结果显示MYOZ2和MYOZ3均在背肌和心脏中表达较高,大脑、肝脏以及皮肤组织中表达量相当低。各个时期的表达高峰在不同组织中,15d和60d相互之间及其与其它组织时期表达差异极显著(P<0.01),而大脑、肝脏与皮肤相互之间表达差异不显著(P>0.05)。表明MYOZ2和MYOZ3为控制肌肉、心脏发育的主要候选基因之一。MYOZ2基因在凉山半细毛羊出生后有组织表达特异性,心脏和肌肉是其主要的表达组织,预测在生长发育和心脏疾病中有重要作用。同样MYOZ3基因在凉山半细毛羊出生后也有组织表达特异性,肌肉是其重要的表达组织。预测在生长发育中发挥重要的作用。
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