As-SRF在中国卤虫早期胚胎发育过程中的作用

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中国卤虫是一种生活在高盐环境中的甲壳动物,在不良条件下,卤虫会出现滞育现象。当环境条件有利于原肠胚发育时,卤虫的发育重新开始。血清反应因子(SRF)是一种高度保守的顺式作用因子,是MADS转录因子超家族的成员之一,SRF能与许多基因启动子中的调节元件结合。SRF促进中胚层细胞迁移,在胚胎体轴延长中发挥重要作用,对胚胎发育至关重要。该蛋白质能够调节许多早期基因(例如c-fos)的活性,从而参与调节细胞周期、凋亡、生长和分化。但对于SRF在解除滞育过程中的作用机制尚不清楚。本研究通过RACE技术,克隆得出As-srf的全长c DNA序列,As-srf的序列全长为1223bp,其中包括开放阅读框912bp,149bp的3’-UTR和162bp的5’UTR,共编码303个氨基酸,其蛋白分子量约为34KDa,该蛋白为亲水性蛋白,等电点为6.32;通过免疫荧光实验显示As-SRF在中国卤虫身体各部分均有表达,表明此蛋白没有组织和器官特异性;而后又通过实时荧光定量q PCR和Western Bloting结果证明As-srf和As-SRF的表达水平基本一致,在发育到0-20h内表达量在增加,20h以后表达量逐渐降低,表明血清反应因子可能在胚胎重启动和早期胚胎发育过程中扮演着重要的角色。而在温度和盐度的胁迫中应答实验中,As-SRF随着温度的降低和盐度的升高其表达量呈现逐渐下降的趋势,说明As-SRF在低温和高盐胁迫应答过程中发挥重要的调控作用;同时利用Western bloting技术对As-JUN、As-C-FOS、As-SRE和As-ELK1的表达水平进行检测,结果表明各蛋白与As-SRF的表达趋势相近,推测其几种蛋白可以形成AP-1复合物,介导细胞周期中G1期向S期转化;利用小RNA干扰技术,敲低了As-srf的m RNA表达水平后,卤虫胚胎出现了发育缓慢,畸形等非正常状况。上述各项研究结果表明,As-SRF在中国卤虫滞育胚胎重启动和早期胚胎发育过程中发挥了重要的作用。本文通过对As-SRF在中国卤虫早期胚胎发育和滞育胚胎重启动过程的研究,进一步分析SRF的作用,对了解滞育胚胎重启动的分子机制方面具有较为重要的研究意义,也为有关“甲壳动物和其他无脊椎动物的滞育胚胎重启动的分子机制”的研究提供了参考资料。
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