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顺铂是治疗非小细胞肺癌的一线化疗药物,但在治疗的后期阶段,多数患者都会对其产生耐药性,如何使顺铂增敏是当今医学界亟待解决的问题。之前的研究报道包括顺铂在内的化疗药物可以增加肿瘤细胞内ROS的产生以驱动氧化应激从而诱导肿瘤细胞凋亡,人们期待着通过尽可能多的办法增加细胞内氧化应激水平以起到最大的肿瘤治疗效果。值得注意的是,SIRT3作为一种去乙酰化酶在肿瘤的发生发展过程中起到重要作用,它可以通过去乙酰化线粒体内的关键蛋白,从而参与肿瘤细胞的氧化应激、能量代谢和细胞凋亡过程,进而可能为解决肿瘤细胞的耐药问题提供一个新的方向。因此,探讨SIRT3、氧化应激和顺铂耐药的关系,可能为包括但不限于非小细胞肺癌的恶性肿瘤的治疗提供一种思路。本研究以非小细胞肺癌患者组织及非小细胞肺癌NCI-H1299细胞为研究对象,以氧化应激的角度切入,探讨SIRT3抑制剂3-TYP与顺铂联用对肿瘤细胞凋亡的影响及其机制,为优化恶性肿瘤的化疗方案提供理论支撑。方法:一、SIRT3在非小细胞肺癌患者组织中的表达情况免疫组织化学染色检测84例非小细胞肺癌患者肿瘤组织中SIRT3的表达情况。二、SIRT3抑制剂3-TYP对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞顺铂敏感性的影响及机制实验分组:对照(CON)组、3-TYP组、顺铂(DDP)组、3-TYP+DDP组1.MTT法检测单独使用SIRT3抑制剂3-TYP或单独使用DDP以及两者联合使用对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞存活率的影响并确定3-TYP联合DDP的最佳浓度。2.Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western-blot检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达情况。3.DCFH-DA染色流式细胞术检测各组细胞ROS水平。4.SOD试剂盒检测各组细胞SOD活力。5.JC-1染色流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电势的变化。6.Western-blot检测各组细胞SOD2蛋白表达水平。结果:一、SIRT3在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中高表达免疫组化结果显示,与正常肺组织相比,非小细胞肺癌肿瘤组织SIRT3的表达量增多(P<0.05)。二、SIRT3抑制剂3-TYP通过调节非小细胞肺癌NCI-H1299细胞内的氧化应激水平增加其化疗敏感性1.MTT检测结果显示,与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组能够明显抑制非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的存活率,且3-TYP和DDP的最适浓度分别为5u M和2.5ug/ml。2.凋亡检测结果显示,与CON组相比,3-TYP组细胞凋亡率没有明显的变化,DDP组细胞凋亡率有所上升;与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组细胞凋亡率上升更加明显(P<0.05)。Western-blot结果显示,与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax与Cleaved-caspase3表达增加(P<0.05)。3.DCFH-DA染色流式细胞术结果显示,与CON组相比,3-TYP组、DDP组,ROS含量增加;与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组的ROS含量增加更加明显(P<0.05)。4.SOD试剂盒检测结果显示,与CON组相比,3-TYP组、DDP组,SOD活力下降;与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组的SOD活力下降更加明显(P<0.05)。5.JC-1染色流式细胞术检测结果显示,与CON组相比,3-TYP组、DDP组线粒体膜电势有所下降(P<0.05);与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组的线粒体膜电势下降更为明显(P<0.05)。6.Western-blot检测结果显示,与CON组相比,3-TYP组、DDP组,SOD2蛋白表达降低;与DDP组相比,3-TYP与DDP联合使用组的SOD2蛋白表达降低更加明显(P<0.05)。结论:SIRT3抑制剂3-TYP与顺铂联合使用,提高了非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的氧化应激水平,促进其发生线粒体途径的凋亡,说明SIRT3抑制剂3-TYP增加了非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的顺铂敏感性。