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核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)是广泛存在于高等植物的一类RNA N-糖苷酶,它能够催化断裂真核生物28S rRNA的特殊颈环结构的N-C糖苷键,脱去一个腺嘌呤,从而破坏核糖体的结构,阻遏蛋白质的生物合成。近年来,利用核糖体失活蛋白构造与抗癌药物结合构造的免疫毒素在治疗癌症方面显示出广阔的应用前景。三角梅核糖体失活蛋白Bouganin最初从红花三角梅(Bougainvillea spectabilis wild)中分离,为Ⅰ型核糖体失活蛋白,是目前所发现的毒性最低的一种RIPs。本实验室利用同源序列克隆法从厦门市紫叶三角梅中成功克隆Bouganin基因并进行了原核表达等研究工作。但由于原核表达的蛋白多以包涵体的形式存在,纯化困难,另外原核表达蛋白免疫制备的抗体效价不高。本研究克隆了三角梅核糖体失活蛋白基因Bouganin,然后以毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)为表达菌株中,以pPIC9K为载体,构建了GS115-pPIC9K-Bouganin酵母的体外表达系统,然后对表达条件进行优化,最后利用固相金属离子亲和层析(IMAC)纯化得到Bouganin蛋白,并进行了 MTT法抗肿瘤活性鉴定。研究结果表明(1)所得到的酵母GS115转化子表型是muts型,利用的是酵母表达系统的AOX2启动子;(2)最佳表达时间为48 h,最佳表达温度为22℃;(3)重组蛋白Bouganin能够分泌到培养基中,纯化方便,但是表达量相对前期本实验室原核表达该蛋白低,为0.225 mg/L;(4)MTT法抗肿瘤活性鉴定表明其对肿瘤细胞的抑制性比原核表达的Bouganin蛋白的抑制效果略好,在Bouganin加入浓度为100ug/mL时,真核Bouganin蛋白对Hela、HEP3B、A549细胞的抑制率分别为为27.75%、18.05%、20.68%,而原核Bouganin蛋白抑制率分别为为20.27%、6.84%、13.79%。经过单因素方差分析,各个浓度下真核和原核Bouganin蛋白对肿瘤细胞的抑制率之间不具有显著性。