浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学调查及ORF5基因的遗传变异分析

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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种高度接触性传染病。在临床上主要表现为母猪的流产、产死胎、产木乃伊胎和弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸系统疾病,具有较高的死亡率。2006年,高致病性PRRS在我国爆发,其病原是PRRS病毒的变异株(HP-PRRSV),临床特征为高发病率,高死亡率及传播迅速。目前该病已成为威胁我国养殖业的主要疫病之一,给养猪户带来严重危害并造成了巨大的经济损失。   为了解浙江省PRRS病毒的变化动态。本实验建立了PRRSV NSP2基因的RT-PCR检测方法,用于鉴别临床高致病性PRRSV与经典PRRSV毒株。并对2004~2011年来自浙江省不同地区的942份临床样品进行了检测,结果显示PRRSV在我省临床病例中的检出率达52.9%。   本研究选取2004~2009年RT-PCR鉴定为NSP2基因阳性的病料,进行ORF5基因的扩增及序列测定,结果获得61份阳性病料的ORF5基因,分别取3个阳性转化子进行序列测定,共得到可比序列117个。与国内外参考株进行比较结果表明:所有分离毒株与美洲型毒株VR2332亲缘关系较近,均为美洲型毒株。所有分离株之间推导氨基酸的同源性为79.6%~100.0%,与美洲株VR2332的同源性为77.1%~88.6%,与经典株CH-1a的同源性为81.6%~93.5%。根据进化树分析,所得分离株可分为3个亚群,Ⅰ类亚群为2006年以后的野毒株,Ⅱ类亚群为2004~2005年的野毒株,Ⅲ类亚群与疫苗株在同一分支上,可能是疫苗株演变而来。推导为氨基酸后比对结果显示变异主要发生在N-端前50个氨基酸的信号肽区域,其中中和表位39位点处均由L39-I39,疫苗株与野毒株的区分位点137位点处均由A137-S137,与毒力相关的位点13位点和151位点处,Ⅰ类和Ⅱ类亚群均为R13和R151。蛋白特性分析表明潜在糖基化位点为3~5个,糖基化位点的增多可能与病毒毒力增强相关。   本研究结果还显示自然感染猪体内同时存在不同的PRRSV变异株,不仅不同地区不同猪场之间存在着这种差异,而在同一猪体内也存在不同的PRRSV变异株,在氨基酸水平上存在21%和7%的差别。
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