川滇特色资源爬沙虫缩尿作用研究及其主要成分分析

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目的:爬沙虫是广翅目齿蛉科昆虫幼虫的俗称,主要分布于四川攀西及云南大理、丽江、西双版纳等地,民间认为爬沙虫营养丰富,在攀西地区享有“虫参”、“安宁土人参”和“动物人参”的美誉。爬沙虫在彝族、白族、哈尼族、纳西族等多民族长期使用,不仅是一种特色食用昆虫,还是一味民间药,认为其具暖肾阳、疗肾虚之效,是治疗小儿遗尿、老人体虚夜尿的特效药。然而,目前对于爬沙虫的研究主要集中在生物学上的研究,对其药用价值的研究极少,爬沙虫作为药用的物质基础研究缺失,同时,爬沙虫作为民间治疗小儿遗尿、老人体虚夜尿的作用缺乏实验依据且机制不明。故本研究测定爬沙虫主要成分拟促进爬沙虫资源的开发,并借此推测爬沙虫作为药用可能存在的物质基础,并建立三种常用多尿模型,考察爬沙虫缩尿作用,并对其可能存在的机制进行初步探讨。方法:1.爬沙虫主要成分分析:采用系统预试法对爬沙虫所含化学成分进行较全面的预实验,并对预实验结果为阳性的化学成分进行含量测定;采用全自动氨基酸分析仪对爬沙虫所含氨基酸组分及含量进行分析;采用ICP-MS对爬沙虫所含22种矿质元素进行分析。2.爬沙虫缩尿作用研究:建立单纯水负荷、D-半乳糖致衰老、腺嘌呤致肾阳虚这三种常见大鼠多尿模型对爬沙虫缩尿作用进行验证与评价。3.爬沙虫缩尿作用机制初步探讨:结合文献考察以及“2”中三种多尿模型结果,以腺嘌呤致肾阳虚大鼠模型为基础,对大鼠肾功能指标肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)以及肾脏组织病变进行考察,通过Elisa法测定大鼠血清中抗利尿激素AVP含量,Westblot测定相关蛋白AQP-2、AVPR-V2的表达,从“温肾”、“缩尿”两部分对爬沙虫缩尿机理进行初步探讨。结果:1.爬沙虫主要成分分析:爬沙虫主要含有蛋白、多糖、脂肪、有机酸四类化学成分,测得含量分别为4.87%±0.03%(水溶性蛋白)、1.90%±0.09%、16.45%±0.70%、3.54%±0.06%;共检测出14种氨基酸,总氨基酸(TAA)含量为52.01%,其中必需氨基酸与总氨基酸的比值(EAA/TAA)为48.18%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(EAA/NEAA)为92.99%;常量元素以Na、K、P含量最高,微量元素中以Fe、Mn、I含量最高,且爬沙虫有害元素含量未超出规定标准的限度。2.爬沙虫缩尿作用研究:(1)对单纯水负荷多尿大鼠:爬沙虫中剂量(0.34g/kg)给药7 d后表现出较为明显的缩尿作用,给药15 d后,中剂量组及缩泉丸组均显现出明显的缩尿作用,给药21 d后各给药组均显现出缩尿作用。(2)对D-半乳糖致衰老多尿大鼠:爬沙虫给药组虽表现出一定的对衰老大鼠尿量的减少作用,但这种减少未见统计学差异(p>0.05),效果不如缩泉丸。但爬沙虫给药组表现出较为明显的抗衰老作用,可明显改善衰老大鼠的记忆能力,以及大鼠脑组织中抗氧化的相关指标(p<0.05)。(3)对腺嘌呤致肾阳虚大鼠:爬沙虫给药组表现出较强的缩尿作用,且这种作用呈现一种剂量依赖性。3.爬沙虫缩尿作用机制初步探讨:爬沙虫给药可明显降低肾阳虚大鼠肾脏系数,对肾脏病变有一定的改善作用,同时可降低血清中Cr、BUN含量,升高大鼠血清AVP含量以及增加AQP-2和AVPR-V2蛋白的表达。结论:爬沙虫中富含蛋白、多糖等成分,其氨基酸配比合适,可作为优质蛋白的选择,爬沙虫中富含的微量元素Fe、Mn、I可能是其作为药用的基础之一。此外,爬沙虫对于水负荷大鼠的缩尿作用较稳定,而对于衰老模型大鼠缩尿效果不佳,但表现出一定抗衰老作用,对肾阳虚多尿大鼠表现出较强的呈剂量依赖式的缩尿作用,同时,推测爬沙虫通过对肾脏的保护、升高大鼠对血管加压素二型受体(AVPR-V2)蛋白的表达从而促进大鼠抗利尿激素AVP的释放使得肾脏集合管上的水通道蛋白2(AQP-2)蛋白表达增强,增强肾脏集合管的收缩能力,增强肾小管对水的重吸收,从而起到缩尿作用。
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