线粒体调控原始卵泡形成的研究

来源 :中国科学技术大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:adamadama
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在哺乳动物中,原始卵泡库的大小决定雌性生育期的长度。原始卵泡库由原始卵泡组成,并形成于围产期。原始卵泡形成过程中,大量卵母细胞凋亡,只有少数卵母细胞存活下来并被体细胞包裹形成原始卵泡。为了解哪些蛋白质通过哪些信号通路调节原始卵泡形成,我们利用2D-PAGE和MALDI-TOF/TOF分离并鉴定出78个在原始卵泡形成前和形成过程中差异表达的蛋白质,并利用体外培养卵巢RNAi技术对其从功能上进行筛选,发现其中29个蛋白质在体外培养卵巢中的敲减后影响卵母细胞存活和原始卵泡的形成。利用生物信息学方法对这29个蛋白质的表达定位和可能参与的生物学过程等进行分析,发现其中8个(ATP5a1、Immt、SOD1、Ndufb10、VCP、Cecr5、Aldh6a和Myg1)蛋白定位于线粒体并与线粒体的功能密切相关。在体外培养卵巢组织中,分别下调这些蛋白的表达都会引起卵母细胞中线粒体结构与功能异常、卵母细胞凋亡和卵泡数量减少。SOD1点突变小鼠的研究表明,SOD1突变后影响线粒体的结构和功能,卵母细胞的凋亡明显增多,原始卵泡形成减少。利用L-GSH恢复SOD1突变带来的体内氧化还原状态的改变能够恢复线粒体的功能从而恢复原始卵泡的形成的抑制。我们还发现在正常生理情况下,处于cyst中的大部分卵母细胞其异常线粒体的比例较高,只有少部分的卵母细胞中异常线粒体的比例较低,原始卵泡中卵母细胞的异常线粒体比例接近与异常线粒体比例较低的cyst中的卵母细胞。用cyt c免疫胶体金的原位检测cyst和原始卵泡的卵母细胞中cyt c的定位,发现处于cyst中的大部分卵母细胞的细胞质中cyt c含量高,而原始卵泡中的卵母细胞的细胞质中cyt c含量低。我们推测异常线粒体比例高的卵母细胞通过cyt c的释放最终启动卵母细胞的凋亡,异常线粒体比例低的卵母细胞则会存活下来并形成原始卵泡。综上所述,我们的工作第一次系统地从功能上对原始卵泡形成过程中可能参与调控的蛋白质进行了筛选鉴定,发现线粒体通过调控卵母细胞的凋亡而影响原始卵泡的形成,为卵泡形成中卵母细胞凋亡的调控机制提供了新解释。
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