目的:构建pCD513B-KLHL24载体,探究KLHL24对结肠癌细胞系SW480和LOVO增殖、侵袭及迁移的影响,并筛选KLHL24的相互作用蛋白。方法:构建pCD513B-KLHL24载体,泛素化蛋白质组label-free技术分析筛选KLHL24的相互作用蛋白;将pCD513B-KLHL24与psPAX2和PMD2.G质粒包装成慢病毒;慢病毒转染SW480细胞和LOVO细胞,用嘌呤霉素筛选出稳定过表达KLHL24的SW480和LOVO细胞系;蛋白免疫印迹检测KLHL24蛋白的表达;通过MTT、克隆形成及transwell分别检测KLHL24对SW480和LOVO细胞增殖、侵袭及迁移的影响;细胞免疫荧光检测SW480细胞和LOVO细胞中KLHL24的表达情况;免疫组化检测结肠癌组织及癌旁组织中KLHL24蛋白的表达情况。结果:1、成功建立稳定过表达KLHL24的SW480和LOVO细胞系。2、GO分析显示KLHL24在生物学过程方面主要与核苷酸代谢、蛋白质翻译及定位等具有密切相关性,在细胞组分方面主要与细胞质及核糖体等相关,在分子功能方面主要与rRNA结合及核糖体结构成分相关;KEGG分析显示KLHL24主要与细胞凋亡、雌激素信号通路、P53信号通路等相关;蛋白质相互作用网络显示KLHL24可能与CDK1、KRT18、BRCA2等蛋白具有相互作用关系。3、稳定过表达KLHL24对SW480细胞和LOVO细胞的侵袭、转移及增殖的影响无统计学差异。4、KLHL24在SW480和LOVO细胞的细胞质及细胞核中均有表达,KLHL24在结肠癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异。结论:1、稳定过表达KLHL24对SW480细胞和LOVO细胞的增殖、侵袭及迁移无明显影响。2、KLHL24与CDK1、KRT18、BRCA2等蛋白可能具有相互作用关系。