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目的:本研究旨在探讨YTH结构域m6A RNA结合蛋白2(YTHDF2)在胰腺癌组织和三种胰腺癌细胞株的表达,并分析其对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,初步探讨其影响上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)作用的分子机制,为胰腺癌的临床诊断、治疗提供新的策略。方法:(1)运用公共数据库资料比较正常胰腺组织和胰腺癌组织YTHDF2 mRNA及蛋白表达水平;(2)Western blot,荧光定量PCR检测人胰腺癌细胞株(PaTu8988、SW1990、BxPC3)中YTHDF2 mRNA及蛋白质的表达水平;利用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建YTHDF2 shRNA干扰质粒sh-YTHDF2,并进行慢病毒包装,感染胰腺癌细胞,嘌呤霉素筛选得到能稳定低表达YTHDF2的胰腺癌细胞株,Western blot、荧光定量PCR检测干扰效率;(3)用平板克隆形成实验和CCK-8法检测YTHDF2对胰腺癌细胞增殖能力的影响,Western blot检测增殖相关指标CyclinD1及其上游蛋白;(4)Transwell迁移实验和划痕实验检测YTHDF2对胰腺癌细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测YTHDF2对胰腺癌细胞侵袭能力的影响,荧光定量PCR、Western blot检测侵袭相关指标MMP2和MMP9 mRNA及蛋白表达量的影响;(5)Western blot检测上皮间质转化相关指标E-cadherin、Vimentin和Snail的蛋白水平的变化,以及影响上皮间质转化的关键蛋白YAP,初步探明YTHDF2影响EMT的分子机制。结果:(1)数据库显示正常胰腺组织的YTHDF2 mRNA及蛋白表达水平均低于胰腺癌组织,肿瘤分期级别越高的患者其YTHDF2的表达量也越高,并且病理分期T3和T4的患者YTHDF2的表达高于T1和T2的患者;(2)胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3中YTHDF2表达量相对较高;靶向干扰YTHDF2 shRNA慢病毒载体构建成功,慢病毒包装并感染SW1990、Bx PC3细胞株,Western blot、荧光定量PCR检测结果表明YTHDF2 shRNA在胰腺癌细胞中能有效的干扰YTHDF2的蛋白和mRNA表达水平;(3)SW1990和Bx PC3中分别下调YTHDF2的表达,细胞增殖率、克隆形成能力降低,p-Akt、p-GSK3β和CyclinD1的表达水平下降;(4)SW1990和Bx PC3中分别下调YTHDF2的表达,胰腺癌细胞的迁移能力、侵袭能力增强,MMP2和MMP9 mRNA及蛋白表达水平升高;(5)靶向沉默YTHDF2的表达后,细胞上皮表型标志物E-cadherin表达水平下降,间质表型标志物Vimentin和Snail表达水平明显升高,促进了上皮间质转化的途径不是经典的TGF-β/Smad通路,而是通过上调了YAP的表达。结论:(1)YTHDF2表达水平在胰腺癌组织升高;(2)YTHDF2协调了胰腺癌细胞的增殖和上皮间质转化;(3)下调YTHDF2促进上皮间质转化的途径不是经典的TGF-β/Smad通路,而是通过上调了YAP的表达。