土壤解磷微生物的分离鉴定

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为了获得具有应用潜力的微生物肥料活性菌株,本研究从河南省郑州、信阳、许昌等地采集35份土壤样品,采用选择性培养基筛选具有解磷功能的微生物菌株,并分别通过钼锑抗比色法和对峙培养法测定其解磷活性和拮抗作用,通过室内盆栽试验检测了解磷活性最强的菌株对番茄植物的促生作用,根据形态特征、生理生化特性、16S rDNA序列分析对分离物进行分类鉴定。试验结果如下:1、采用选择性培养基,从35份土壤样品中筛选获得解磷细菌53株和解无机磷真菌7株。53株解磷细菌中,解无机磷细菌30株,解有机磷细菌23株。2、通过钼锑抗比色法对53株解磷细菌和7株解磷真菌的解磷活性进行了测定。结果表明,供试菌株均能不同程度地从磷酸钙和卵磷脂中释放出一定的可溶态磷,且解无机磷真菌的解磷活性均大于解磷细菌。其中,解磷真菌WPFJ1的解磷活性达180.00μg/mL,解磷细菌WP1的解磷活性为165.72μg/mL。3、拮抗实验表明,15株解磷细菌对番茄早疫病菌(Alternaria solani)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var. tritici)、小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)和稻曲病菌(Ustilaginoidea oryzae)等植物病原菌有一定的拮抗作用。4、通过盆栽试验,测定了解磷细菌WP1、WP-BT2-8、YP21和解磷真菌WPFJ1单一菌株和组合菌株的促生作用。结果表明,供试菌株对番茄生长均有一定的促进作用。其中,单一菌株促生试验中,菌株WPFJ1对番茄植株的促生效果最为明显;组合菌株促生试验中,菌株WP1与菌株WP-BT2-8组合,其促生效果最好。5、分别测定了解磷菌WP1、WP-BT2-8、WPFJ1和YP21的生长曲线。结果表明,供试菌株均能在缺乏有效磷的环境下,从底物中分解出可溶性磷。解无机磷菌在培养过程中,其培养液pH下降,初步推断菌株的解磷活性与其分泌的酸性物质有关;解有机磷细菌在培养过程中,其培养液pH变化不明显,初步推断其解磷机理可能为酶解作用。6、分别对53株解磷细菌的16S rDNA序列和7株解磷真菌的ITS序列进行了分析。结果表明,53株解磷细菌分别属于芽胞杆菌(Bacillus)、类芽胞杆菌(Paenibacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、伯克氏菌属(Burkholderia)、肠细菌属(Enterobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)和沙雷氏菌属(Serratia)7个属,18个种以上,表明河南省土壤解磷细菌种群丰富;7株解磷真菌分别属于青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)和茎霉属(Chaunopycnis)。解磷活性较强的菌株WP1被鉴定为稳定伯克氏菌(Burholderia stabilis),菌株WP-BT2-8和YP21被鉴定为多粘类芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa),菌株WPFJ1被鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。
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