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CpG ODN基序（CpG ODN motif）是存在于细菌，病毒和无脊椎动物DNA中以非甲基胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸为核心的寡核苷酸序列，具有强烈的免疫刺激活性。CpG ODN基序既能活化天然免疫系统，如单核巨噬细胞、树突状细胞（dendritic cell,DC）、NK细胞；又能激活获得性免疫系统，包括B细胞和T细胞。CpG ODN免疫刺激活性及其分子机制的研究是当前CpG ODN研究的热点。 本研究探讨了CpG ODN对白血病细胞的诱导分化作用以及CpG活化DC过程中的信号转导机制。第一部分 CpG ODN诱导FBL-3白血病细胞分化和凋亡的实验研究 诱导分化治疗是指分化停滞或未成熟的肿瘤细胞在某些因素作用下分化为成熟有功能细胞的过程，是治疗肿瘤、特别是治疗白血病的有效手段之一。研究表明髓系和淋巴系白血病细胞能在多种因素的诱导下分化为粒细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞。这些因素包括全反式维甲酸（all-trans retinoic acids ATRA）、佛波酯（phorbol12-myristate 13-acetate PMA）、维生素D衍生物以及某些细胞因子。国外学者观察到人B淋巴细胞白血病细胞能在CpG作用下表达CD86，刺激T细胞增殖。我们设想CpG可能具有能诱导白血病细胞分化的作用。 本室以往的工作发现，小鼠红白血病细胞株FBL-3在GM-CSF作用下可分化为单核巨噬细胞，并进一步分化为树突状细胞。利用此细胞模型，我们研究了CpGODN对FBL-3白血病细胞的诱导分化作用。首先观察了CpG ODN对FBL-3形态和增殖的影响，CpG ODN作用72小时后，相差显微镜下观察到FBL-3细胞由光滑、 第二军医大学硕士研究主学位论文 圆形变得不规则，细胞表面粗糙，产生许多细小的突起；MTT法检测FBLl的增 殖情况，显示CpG ODN能抑制FBLI细胞的增殖，其抑制作用呈剂量依赖性。流 式细胞仪（FACS）检测 FBL〕细胞表面分子表达的变化，证明 CpG ODN能诱导 FBLl 表达 CD分子。同样条件下，non（pG ODN和 ZpG不能诱导 FBL上细胞发生形 态改变和CD14分子的表达。NBT还原实验显示，经CpG ODN作用后的FBL上细 胞，NBT还原阳性率明显上升，与未处理组相比，差异显著…＜以刀5人 CpG ODN 处理后FBL－3细胞MHCH类分子和共刺激分子CD40、CD54、CD86的表达也上调。 混合淋巴细胞反应（MLR）检测CpG ODN诱导后FBL上细胞刺激同种T细胞增殖 的能力，结果表明，CpG ODN诱导分化后的FBL占细胞能有效刺激T细胞增殖。 另外，在h的协同作用下CpG ODN可诱导FBL5细胞分泌NO。上述结果从 不同的角度说明CpG ODN能诱导FBL上白血病细胞分化为单核巨噬样细胞，并具 有成熟细胞的功能。 为了解FBL习细胞在CpG ODN诱导下细胞分化为单核巨噬样细胞后是否进一 步发生凋亡，我们用 PI染色法检测细胞凋亡，经 CpG ODN作用后的 FBL习细胞， 细胞凋亡率显著高于未处理组。Hoechst22358细胞核染色发现，CpG ODN处理后 的FBL3细胞出现核染色质的固缩、边集，出现新月小体等凋亡特征。这些结果证 明CpG ODN能诱导FBL习细胞凋亡。我们还初步探讨了CpG ODN诱导FBL刁细 胞凋亡的机制，通过免疫细胞组化检测caspase习 P20的表达情况，结果表明，CpG ODN能增强路地ase3 P20的表达水平，caspasel抑制剂能部分阻断CpG ODN诱 导的 FBL刁细胞凋亡。以上实验说明，CpG ODN能诱导 FBL习细胞的凋亡，caspase习 的活化参与了这一凋亡过程。 综上所述，我们探讨了CpG ODN对白血病细胞株FBL上的诱导分化和凋亡作 用，结果表明，CpG ODN能抑制FBL上细胞的增殖，诱导FBL〕细胞分化为单核 巨噬样细胞，分化后的细胞表面MHC分子和共刺激分子表达增加，具有很强的刺 激T细胞增殖的能力。这提示分化后的白血病细胞本身有可能作为APC提呈自身 存在的肿瘤抗原，激发抗肿瘤免疫应答。CpG ODN能诱导 FBLI细胞凋亡，caspaseI 活化参与这一凋亡过程。本实验结果为白血病诱导分化治疗提供了新线索。’Z；iZGiitato6rsm；z；；；Zi＝x；；3 第二军医大学硕土研究生学位论文 第二部分 CpG ODN诱导 DC活化的信号转导途径的初步研究：氯喳、 百日咳毒素、霍乱毒素及Forskolin的调节作用 DC是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞，能激活初始型T细胞。未成熟DC 在抗原或某些刺激因素的作用下可分化成熟，成熟后 DC MHC分子及共刺激分子 的表达增加，体外刺激T细胞增殖的能力显著增强。活化后DC能分泌多种细胞因 子，参与调节免疫应答。在诱导DC成熟的刺激因素中，研究较多的是LPS，近几