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在研究优化克隆Pcpg1、Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6、Pcpg7、Pcpg9、Pcpg10、Pcpg12、Pcpg16、Pcpg17、Pcpg19、Ppgip和AnpgⅠ基因或基因片段(外含子)PCR条件的基础上，以Phytophthora cinnamomi基因组DNA或质粒DNA为摸板，对上述基因或基因片段进行了克隆、测序与分析、连接及构建了它们的表达载体；利用酵母菌遗传转化方法，将各个目的基因导入了酵母菌菌种W303-1B；应用Western blotting技术和PG活性检测方法研究和分析了目的基因的表达；对不同pg基因的表达与A Pgip、T Pgip和P Pgip基因的表达的相互作用进行了初步研究。同时，对Pg基因诱导表达的时间与方法进行了试验分析，并研究规范了大肠杆菌菌落PCR和酵母菌菌落PCR的技术与方法。获得了以下主要结果： 1．构建了Pcpg1、Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6、Pcpg7、Pcpg9、Pcpg10、Pcpg12、Pcpg16、Pcpg17、Pcpg19和Ppgip基因的表达载体。该表达载体是在pYES2酵母菌表达载体的基础上改建的，它包含半乳糖诱导启动子序列、氨苄青霉素抗性基因序列、尿嘧啶基因序列、2μ复制起始点序列及一由α因子前体蛋白序列、Kex2酶切位点序列和3×HA肽链标记序列组成的大小为363bp的复合序列，可使PG高拷贝复制并被分泌表达。经菌落PCR检测和酶切分析表明，所构建的不同基因表达载体完全符合设计要求，可用于遗传转化研究。 2．优化获得了克隆Pcpg1、Pcpg2、Pcpg4、Pcpg7、Pcpg10、Pcpg19和Ppgip基因及克隆AnpgⅠE1、AnpgⅠE2、AnpgⅠE3、Pcpg6E1、Pcpg6E2、Pcpg9E1、Pcpg9E2、Pcpg12E1、Pcpg12E2、Pcpg16E1、Pcpg16E2、Pcpg17E2和Pcpg17E3外显子的PCR反应条件。序列分析表明，克隆上述基因或外显子的PCR反应条件为最适PCR反应条件，可用于上述基因或外显子的克隆及其研究。 3．序列分析和遗传转化表达研究明确了11个Pcpg基因和Ppgip基因的大小，其中Pcpg1、Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6、Pcpg7、Pcpg9、Pcpg10、Pcpg12、Pcpg16、Pcpg17、Pcpg19和Ppgip基因的大小分别为1011bp、1011bp、1011bp、1017bp、1170bp、1059bp、1290bp、1293bp、996bp、996bp、1146bp和1026bp。 4．通过比较所克隆基因的序列结果与基因组文库机读结果，进一步明确了Pcpg1、Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6、Pcpg7、Pcpg9、Pcpg16、Pcpg17、Pcpg19和PPgip基因的序列；更正了基因组文库机读结果，其中Pcpg10的第390个氨基酸——丙氨酸A(GCC)应为甘氨酸G(GGC)，Pcpg12的第219个氨基酸——亮氨酸L(TTG)应为苯丙氨酸F(TTC)。这一结果为这些基因的正确登录奠定了基础。 5．获得了转化Pcpg1、Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6、Pcpg7、Pcpg9、Pcpg16、Pcpg17、Pcpg19和Ppgip基因的菌系。PG活性测定表明，转化Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6、Pcpg7、Pcpg9、Pcpg10、Pcpg12和Pcpg17基因的菌系表达PG活性，是有功能的基因；而疫病(尸勺toPhthom cinnam。脚i)Pg基因的克隆、测序及其遗传转化研究转化尸以瞥1沪以啥16和尸邵茗19基因的酵母菌未表达PG活性，是无功能的基因，Westemblotting结果表明，尸以心1、尸印916和尸邵啥19基因能指导合成相应的分泌蛋白质，显而己见，尸印91、尸印916和pcPglg基因所指导合成的分泌蛋白质是没有PG酶活性的。不同的Pg基因表达的PG酶活性强弱有差异，转化尸印92、尸印97和尸印910基因的酵母菌所分泌的PG酶活性最强，转化A那瞥I、尸以啥4、尸印912和尸以啥17基因的酵母菌所分泌的PG酶活性次之，转化尸印96和尸邵心9基因的酵母菌所分泌的PG酶活性最弱。 6.诱导Pg基因表达的适宜时间是4小时。转化Pg基因的菌系所合成的PG全部分泌在培养液，细胞内不含PG酶。 7.Westem blotting结果表明，所有供试转化的n个尸cPg基因的菌系均出现了大小不同、深浅不一、连续的多条印迹带，这一结果说明PG的糖基化是一个普遍现象。 8.PG与PGIP相互作用的初步研究表明，APGIP、TPGIP和PPGIP对ANPGI和供试的PCPG均没有抑制作用。 9.规范了大肠杆菌菌落PCR和酵母菌菌落PCR技术。将菌落PCR技术应用于基因克隆和遗传转化可显著提高其效率。