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目的:明确针刺早期干预对延长脑梗死溶栓时间窗的效应,基于“自噬凋亡共同影响缺血半暗带神经细胞死亡进程”理论,探讨针刺延长脑梗死溶栓时间窗的作用机制。方法:采用SPF级SD大鼠,以改良的自体血栓栓塞模型作为脑梗死研究对象,使用rtPA为静脉溶栓药物,“醒脑开窍”针刺法为干预手段。分为实验一与实验二两部分。实验一、针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应研究:将80只SD大鼠随机分组为假手术组、模型组、4.5h溶栓组组、6h溶栓组、7.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组、针刺+7.5h溶栓组。观察早期针刺干预对各组大鼠脑梗死体积、神经行为学评分、颅内溶栓出血性转化及脑水肿的影响,以明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应。实验二、针刺调控自噬凋亡交互作用延长脑梗死溶栓时间窗的机制研究:在明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗效应后,将50只SD大鼠随机分组为假手术组、模型组、6h溶栓组组、针刺+6h溶栓组;采用Western blot、Real time-PCR检测不同组间自噬标志蛋白LC3、Beclin1及p62的表达情况。分组不变,采用Western blot观察不同组别抗凋亡蛋白Bcl2和促凋亡蛋白Bax的表达情况,并观察Bc12/Beclin1、Bcl2/Bax 比值变化,以明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的作用机制。结果:（1）各组大鼠神经行为学评分:治疗后24h评分,与模型组比较,4.5h溶栓组神经行为学评分降低（P<0.05）,而时间窗外溶栓组,6h溶栓组、7.5h溶栓组行为学评分差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组、6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组神经行为学评分均降低（P<0.05）。但针刺+7.5h溶栓组与模型组、7.5h溶栓组相比,神经行为学评分均差异无统计学意义（P>0.05）。表明针刺可以改善溶栓时间窗外（6h）溶栓大鼠的神经行为学评分。（2）各组大鼠脑梗死体积百分比:与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5 h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑梗死体积缩小（P<0.05）。针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,梗死体积缩小（P<0.05）。表明针刺可减少时间窗外（6h）溶栓大鼠的脑梗死体积。（3）各组大鼠脑出血性转化:与模型组相比,6h溶栓组、7.5h溶栓组、针刺+7.5h溶栓组血红蛋白含量均升高（P<0.05）,说明超时间窗外溶栓会增加出血性转化风险。针刺+6h溶栓与6h溶栓比,血红蛋白含量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外（6h）溶栓大鼠的脑出血性转化。（4）各组大鼠脑含水量:与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑含水量均降低（P<0.05）;而时间窗外6h溶栓组、7.5溶栓组脑含水量均增加（P<0.05）。针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,脑含水量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外（6h）溶栓大鼠的脑含水量。（5）各组大鼠神经细胞自噬水平的表达:①WB结果显示:与假手术组比,各组Beclin1、LC3蛋白表达水平上升（P<0.05）,而p62各组蛋白表达水平下降（P<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组Beclin1、LC3、p62表达无统计学差异（P>0.05）,针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3表达上升,p62表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3表达上升,p62表达下降（p<0.05）。②RT-PCR结果显示:与假手术组相比,各组Beclin1、LC3 mRNA的表达水平上升,p62 mRNA表达下降（p<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组和针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3 mRNA的表达上升,针刺+6h溶栓组p62 mRNA的表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3 mRNA的表达上升,p62表达下降（p<0.05）。表明针刺可上调时间窗外溶栓大鼠自噬标志物Beclin1、LC3,并下调溶酶体标志物p62的蛋白和mRNA表达水平,进而适度激活细胞自噬。（6）各组大鼠神经细胞凋亡水平的表达:①WB结果显示:与假手术组相比,模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bc12、Bax表达均上升（p<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组Bcl2、Bax表达无统计学差异（p>0.05）,但针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）。②RT-PCR结果显示:与假手术组相比,模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bcl2、Bax mRNA表达均上升（p<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组Bcl2、Bax表达无统计学差异（p>0.05）,但针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）,表明针刺可上调时间窗外溶栓大鼠抗凋亡Bcl2蛋白和mRNA表达水平,下调促凋亡Bax蛋白和mRNA表达水平,进而抑制凋亡。（7）各组大鼠神经细胞中Bcl2/Beclin1和Bcl2/Bax 比值的表达:通过比值比较,与假手术组相比,模型组Bc12/Beclin1比值上调、Bcl2/Bax比值下调,6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bc12/Beclin1 比值下调、Bcl2/Bax比值上调（p<0.05）;与模型组相比,6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bc12/Beclin1 比值下调,Bcl2/Bax比值上调（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Bc12/Beclin1 比值下调、Bcl2/Bax比值上调（p<0.05）。结论:（1）针刺及时介入可减轻脑梗死溶栓并发症,并延长安全溶栓时间窗至6h;（2）针刺延长脑梗死溶栓时间窗的作用是通过适度激活脑梗死溶栓后缺血半暗带神经细胞自噬并抑制凋亡的机制而实现。