【摘 要】
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目的本研究以大脑中动脉栓塞手术（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠为实验对象,通过观察针刺对中风后肠道Treg/γ δ T细胞表达和紧密连接功能的影响,探讨电针对中风后大鼠肠道屏障损伤的改善作用,从肠脑轴角度探究电针抗缺血性中风的可能机制。研究方法1.实验选用250-300g雄性SPF级别的Sprague-Dawley（SD）大鼠65只,分为假手术
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目的本研究以大脑中动脉栓塞手术（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠为实验对象,通过观察针刺对中风后肠道Treg/γ δ T细胞表达和紧密连接功能的影响,探讨电针对中风后大鼠肠道屏障损伤的改善作用,从肠脑轴角度探究电针抗缺血性中风的可能机制。研究方法1.实验选用250-300g雄性SPF级别的Sprague-Dawley（SD）大鼠65只,分为假手术组（SHAM）、模型组（MCAO）和电针组（MCAO+电针,mEA）。构建大脑中动脉栓塞所致的脑缺血模型,手术成功后,即进行电针“百会”干预,电针参数为2/15Hz,1-1.2mA,20Min/次,每天一次直至大鼠处死。利用Longa神经功能评分和TTC染色评价模型是否成功。2.采用ELISA和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法测量实验组大鼠血清IL-1β、IL-10水平及缺血侧大脑中TNFα、IL-1β、CXCL1和CXCL2表达水平,观察电针对缺血再灌注大鼠脑组织中炎症反应的调节作用;采用ELISA和RT-qPCR法测量实验组大鼠小肠细胞因子TNFα、IL-1δ、IL-10、CXCL1和CXCL2的表达水平,评价电针对缺血再灌注大鼠肠道炎症因子的调节;采用ELISA技术检测各组大鼠血清二胺氧化酶（DAO）和D-乳酸（D-LAC）水平,评价电针对缺血再灌注大鼠肠道机械屏障功能的调节作用。3.采用流式细胞技术检测小肠粘膜固有层中γ δT细胞（CD45+CD4-TCRγ δ+）和Treg细胞（CD45+CD4+Foxp3+T）表达差异,评价电针对小肠Treg和γδT细胞的调节作用。4.采用免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）和蛋白印迹（Western blot,WB）技术检测小肠Z01、Occludin和Claudin1紧密连接蛋白的表达情况,评价电针对肠道紧密连接结构的调节作用。研究结果1.电针能有效降低脑缺血大鼠的梗死面积和行为学评分;电针显著抑制损伤脑区的促炎因子水平（IL-1β、TNFα、CXCL1和CXCL2）和血清IL-1β的表达水平,同时还能促进缺血损伤后大鼠血清中的IL-10表达水平。2.模型组大鼠小肠中促炎因子IL-1β、TNF α、CXCL1和CXCL2水平显著上调,抑炎因子水平IL-10明显下调;而电针有效抑制缺血再灌注损伤大鼠促炎因子表达,同时,上调IL-10表达水平,表明电针能良性调节缺血损伤大鼠肠道炎症因子水平。3.模型组大鼠肠粘膜固有层中γ δ T细胞表达显著增高,Treg细胞表达水平显著下降,而电针能显著上调Treg细胞表达,同时,抑制γ δT细胞表达。4.脑缺血再灌注损伤大鼠血清D-LAC和DAO水平显著上调,电针干预后能有效降低血清中的D-LAC和DAO表达。5.模型组大鼠肠道Z01、Occludin和Claudinl蛋白表达明显下调,而电针治疗能显著提高紧密连接相关蛋白表达。结论电针能通过调节肠Treg/γ δ T细胞免疫平衡和修复肠道机械屏障功能减轻脑缺血再灌注大鼠的肠道损伤,这可能是电针通过肠脑轴发挥脑保护作用的机制之一。
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