论文部分内容阅读
目的通过体内和体外实验观察小剂量及大剂量辛伐他汀对大鼠动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响并观察辛伐他汀对SREBPs、VEGF表达的调节,旨为探讨他汀类药物是否对VSMCs具有“双向”作用及机制,并为他汀类药物在临床的应用提供进一步实验依据。方法1.体外原代培养大鼠VSMCs,观察辛伐他汀对VSMCs增殖(ELASA方法)、迁移(刮伤实验方法)的影响及SREBP-1、SREBP-2和VEGF的mRNA表达(RT-PCR方法)。2.体内建立大鼠动脉粥样硬化血管损伤模型,分为正常对照组(NC,n=8)、动脉粥样硬化损伤组(AI,n=6)、低剂量辛伐他汀组(LS,n=6)和高剂量辛伐他汀组(HS,n=6)。每天一次灌胃给药:剂量分别为辛伐他汀0.5mg·kg-1·d-1(LS),2.5mg·kg-1·d-1(HS),等量生理盐水(NC,AI)。4周后处死动物,酶法测定各组血脂水平,检测胸主动脉和左颈总动脉内膜/(内膜+中膜)的比值,免疫组化检测VEGF在血管表达及血管内膜细胞类型鉴定,RT-PCR方法检测SREBP-1、SREBP-2和VEGF在血管的表达。结果细胞试验1.与NC组(0.00μmol/L)比较,LS组(0.01μmol/L、0.05μmol/L、0.25μmol/L和0.50μmol/L)VSMCs增殖无统计学差异(P>0.05)。HS组(10.0μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L和100μmol/L)除10.0μmol/L外均显示对VSMCs增殖抑制作用且呈时间及浓度依赖性。2.与NC组(0.00μmol/L)比较,低浓度辛伐他汀(0.50μmol/L)组对VSMCs迁移无促进作用(P>0.05),高浓度辛伐他汀(50.0μmol/L)组明显抑制VSMCs迁移(P<0.01)。3.与NC组(0.00μmol/L)比较,低浓度辛伐他汀(0.50μmol/L)组VSMCs的SREBP-1、SREBP-2 mRNA表达分别增加16.87%、5.62%,无统计学差异(P>0.05),高浓度辛伐他汀(50.0μmol/L)组VSMCs的SREBP-1、SREBP-2 mRNA表达分别增加52.80%、39.13%,有显著统计学差异(P<0.01)。4.与NC组(0.00μmol/L)比较,低浓度辛伐他汀(0.50μmol/L)组VSMCs的VEGF mRNA表达增加6.11%,无统计学差异(P>0.05),高浓度辛伐他汀(50.0μmol/L)组VSMCs的VEGF mRNA表达减少22.32%,有统计学差异(P<0.05)。动物实验1.辛伐他汀干预治疗4周后,血浆TG和HDL-C的水平各组间无统计学差异;与NC组比较,AI组LDL-C和TC水平升高,有统计学差异(P<0.05)。和AI组比较, HS组的LDL-C和TC水平下降,但无统计学差异(P>0.05),而LS组的LDL-C和TC水平无差别(P>0.05)。2.与NC组比较,AI组和LS组内膜/(内膜+中膜)比值明显增高(胸主动脉和左颈总动脉分别是54.01%、49.97%和173.29%、134.96%)(P<0.01)。与AI组比较,LS组降低,但无统计学差异(P>0.05),HS组明显降低(胸主动脉和左颈总动脉分别是32.18%和33.16%)(P<0.01)。3.血管内膜细胞类型鉴定结果显示绝大部分细胞是平滑肌细胞(α-SMA染色呈阳性反应)。4.与NC组比较,AI组和LS组血管SREBP-1、SREBP-2 mRNA表达分别下降38.67%、24.28%(P<0.05)。与AI组比较,LS组SREBP-1、SREBP-2 mRNA表达增加了23.46%、-2.19%(P>0.05),而HS组增加了90.38%、49.10%,有明显统计学差异(P<0.01)。5. VEGF在血管内膜和中层平滑肌细胞表达。与NC组比较,AI组和LS组血管VEGF表达明显增加。与AI组比较,HS组血管VEGF表达明显减少。6.大鼠胸主动脉VEGF mRNA表达:和NC组比较,AI组和LS组分别增加32.27%、38.71%,有明显统计学差异(P<0.01);和AI组比较,LS组无差别(P>0.05),而HS组表达减少33.83%,有明显统计学差异(P<0.01)。结论通过细胞和动物实验得出以下结论:1.辛伐他汀对VSMCs增殖和迁移无双向调节作用。小剂量辛伐他汀对VSMCs的增殖和迁移无促进作用,大剂量辛伐他汀抑制VSMCs的增殖和迁移,且这种作用呈剂量依赖性并不依赖他汀的调脂性。2.上述机制可能与辛伐他汀激活并增加VSMCs SREBPs的mRNA表达及减少VEGF的表达有关,可能是通过激活SREBPs的表达进而抑制VEGF的表达来实现的。