人类疱疹病毒7型表面糖蛋白gH、gL及CD4关系的探讨

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人类疱疹病毒7型(Human herpesvirus 7,HHV-7)是1990年首先从健康人外周血单个核细胞中分离出的一种嗜淋巴细胞疱疹病毒。在人群中感染率高,主要通过唾液传播,初次感染多发生在幼儿时期,且病毒在体内可长期持续存在。HHV-7在临床上可能与婴幼儿急疹、玫瑰糠疹及肾脏移植后的巨细胞病毒综合征等有关。 HHV-7与HHV-6同属β-疱疹病毒亚科,两者DNA序列同源性可达到60%,相应氨基酸序列的同源性也达到53.4%,在宿主范围、感染方式、导致的临床症状等方面有一定的相似性。在对HHV-6糖蛋白的研究过程中发现,gH(与gL结合形成复合物)是HHV-6受体CD46的结合蛋白,在HHV-6入侵宿主细胞的过程起着重要的作用。针对其他疱疹病毒的糖蛋白研究也发现gH蛋白(与gL相互结合形成复合物)在病毒与细胞膜的融合以及感染细胞与邻近细胞膜融合过程中起着重要作用。已知CD4分子是HIV感染细胞的重要受体,也是HHV-7感染的主要受体。HIV的gp120能够与CD4结合,介导HIV入侵宿主细胞的过程。HHV-7与CD4结合的病毒蛋白尚未发现。寻找HH-7编码的,与CD4结合的病毒糖蛋白,将为HIV的防治提供新思路。HHV-7糖蛋白gH是否能够与gL结合形成复合物,其能否在病毒入侵中发挥功能,能否与CD4分子相互作用,是本论文的主要研究内容。 本研究获得了HHV-7编码gH、gL糖蛋白的基因及CD4的编码基因,应用酵母双杂交技术和免疫共沉淀方法,研究了gH、gL蛋白和CD4的相互作用,并且探讨了gH、gL对HHV-7感染引起CPE的影响。研究取得如下主要结果: 一、HHV-7的培养与鉴定 分别接种HHV-7Glasgow标准株于人的脐血单个核细胞(CBMC)和SupT1细胞系。病毒接种后10~15天,镜检出现明显细胞病变效应(CPE)时,以培养物DNA为模板,通过特异性引物扩增,得到493bp的PCR产物。PCR产物测序结果与Genbank中HHV-7RK株、JI株相应序列比对,同源性达到99.9%~100%。
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