EIF3B在舌鳞状细胞癌中的表达及其功能研究

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癌症正在成为每个国家人口死亡的主要原因,并且发病率呈逐年上升趋势,这为各国人民健康和国家财政带来巨大挑战。在人体肿瘤中,口腔恶性肿瘤排在第六位。在头颈部,舌鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma of the tongue,TSCC)是其主要的恶性肿瘤类型。而今,随着医疗技术的突飞猛进,肿瘤的治疗率很大的提高。但对于口腔癌患者,5年生存率依然在50%上下波动。EIF3B是最大翻译起始因子EIF3的一种主要支架蛋白,参与多种重要的细胞活动,且与多种肿瘤的发生发展有关。目的:探索EIF3B在舌鳞状细胞癌中的表达及其功能研究。方法:第一部分:将10对舌鳞状细胞癌患者的癌及癌旁组织进行全蛋白组测序,对测序结果进行加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA),经预后分析验证得到7个差异基因,再进行人类蛋白图谱数据库(human protein atlas,HPA)及Oncomine数据库分析验证,筛选出EIF3B进行下一步功能验证。第二部分:通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)验证EIF3B在舌鳞状细胞癌癌和癌旁组织中的m RNA水平的表达情况;通过免疫组化实验验证EIF3B在舌鳞状细胞癌和癌旁组织中的蛋白质水平的表达情况。第三部分:通过慢病毒感染CAL 27舌鳞状细胞癌细胞系,构建稳定敲降EIF3B细胞系,通过q RT-PCR和蛋白质免疫印迹(western blot,WB)分别验证敲降情况。通过细胞增殖实验、平板克隆实验、Transwell小室实验、划痕实验验证敲降EIF3B对TSCC细胞系CAL 27功能的影响,通过WB和q RT-PCR检测关键蛋白在敲降EIF3B细胞系中的表达情况。结果:第一部分:对舌鳞状细胞癌测序数据进行WGCNA分析,得到7个关键基因(NDUFB3、RPL12、EIF3B、DDOST、PFDN2、HNRNPH1、SEC61G)与舌鳞状细胞癌发展及预后相关。通过在HPA、Oncomine中验证得到4个关键基因(EIF3B、DDOST、PFDN2、SEC61G)在头颈部癌症组织中有不同程度的高表达,且预后差异比较明显。第二部分:q RT-PCR结果显示EIF3B、DDOST、PFDN2、SEC61G在舌鳞状细胞癌组织中较癌旁组织表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果:EIF3B在舌鳞状细胞癌癌组织中表达水平高于癌旁组织。第三部分:与空载组相比,敲降组的CCK-8增殖实验、平板克隆实验、Transwell小室实验、划痕实验的实验结果显示细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,且差异具有统计学意义(P<0.05)。q RT-PCR和WB结果显示敲降组舌鳞状细胞癌细胞系CAL 27的E-钙粘蛋白表达量升高和N-钙粘蛋白的表达量降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:EIF3B在舌鳞状细胞癌组织中的表达高于癌旁组织。经慢病毒干扰EIF3B的表达使舌鳞状细胞癌细胞系CAL 27的增殖、迁移和侵袭能力明显下降,且对上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)过程有一定影响。
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