【摘 要】
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目的:结膜下组织纤维化是眼科临床较常见的疾病,多发于需长期滴用含防腐剂苯扎氯氨的滴眼液来降低眼压的青光眼的患者,以及手术后出现局部创口瘢痕化的患者中,目前尚无有效解决办法。已有很多研究认为非诺贝特在心、肝、肾、肺等组织器官中均有抗纤维化作用,本研究主要探讨了其在大鼠结膜下组织中的抗纤维化作用及其机制。方法:实验分为细胞实验和动物实验两个部分,细胞实验选用成年雄性SD大鼠结膜下组织,消化并培养出原代
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目的:结膜下组织纤维化是眼科临床较常见的疾病,多发于需长期滴用含防腐剂苯扎氯氨的滴眼液来降低眼压的青光眼的患者,以及手术后出现局部创口瘢痕化的患者中,目前尚无有效解决办法。已有很多研究认为非诺贝特在心、肝、肾、肺等组织器官中均有抗纤维化作用,本研究主要探讨了其在大鼠结膜下组织中的抗纤维化作用及其机制。方法:实验分为细胞实验和动物实验两个部分,细胞实验选用成年雄性SD大鼠结膜下组织,消化并培养出原代基质细胞,采用P2代进行实验,分为正常（Ctrl）组、5 ng/mLTGFβ2造模（TGFβ）组、溶剂对照（V）组、200μM非诺贝特给药（Feno）组,之后收细胞行FN-1、α-SMA、PPARα、Smad2、Smad3的聚合酶链式反应（qRT-PCR）和Western Blot（WB）观察其基因和蛋白表达水平;动物实验选用成年雄性SD大鼠,分为正常（Ctrl）组、0.01%BAC造模（BAC）组、溶剂对照（V）组、0.2%非诺贝特给药（Feno）组,分别使用裂隙灯照相来观察眼表损伤情况,石蜡包埋后切片行苏木素-伊红染色（H＆E染色）及Masson染色观察胶原纤维沉积情况,行过碘酸-雪芙染色（PAS染色）观察结膜杯状细胞数目,抗原修复后行组织化学染色检测FN-1、α-SMA,收提结膜下组织蛋白行WB 检测 FN-1、α-SMA、PPARα、TGFβ2、Smad2、Smad3 在蛋白水平的变化,收集结膜下组织RNA后行qRT-PCR观察PPARα、TGFβ2、Smad2、Smad3在基因水平的变化。结果:细胞实验中,在基因和蛋白水平上,加入TGFβ2之后,下游Smad2/3被激活,之后经典纤维化指标FN-1、α-SMA得到上调,而PPARα水平降低,加入非诺贝特则可逆转以上指标的病理性失调。动物实验中,在裂隙灯拍照中,白光下和荧光素钠染色蓝光下各组均没有表现出眼表的明显损伤;Masson染色可见BAC组的蓝色着色面积更大、颜色更深,非诺贝特组下调;免疫组织化学染色中,BAC组FN-1、α-SMA 阳性细胞明显增多,非诺贝特组相对减少,WB结果进一步验证了上述改变;qRT-PCR和WB显示了 BAC组PPARα的降低和TGFβ2、Smad 2/3的激活,非诺贝特组PPARα上升,TGFβ2、Smad2/3基因和蛋白水平的表达下调。结论:通过下调TGFβ2/Smad2/3通路,非诺贝特下调了大鼠结膜下组织纤维化。
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