论文部分内容阅读
背景膀胱癌是我们国家泌尿系肿瘤发病率最高的恶性肿瘤。近年来,膀胱癌的发病率还在呈现一种逐年上升的趋势。膀胱癌的主要治疗手段是手术和化疗等。玫瑰树碱是一种天然生物碱,玫瑰树碱被证明在多种肿瘤中具有抑癌作用,但其对膀胱癌的作用效果及机制尚不明确。目的本研究通过体外实验探索玫瑰树碱对膀胱癌T24细胞系增殖、周期、运动能力的影响和相应的作用机制。方法玫瑰树碱以不同浓度(l-16uM)和不同时间(24-72h)作用于T24细胞,采用MTT法和克隆形成实验检测T24细胞在增殖和活性方面的改变,采用流式细胞术检测细胞在周期方面的改变,采用RT-PCR实验检测MMP,p53mRNA的表达,采用siRNA技术干扰ATM的表达,采用Transwell实验检测细胞在运动能力方面的改变,采用Western Blot实验检测相应蛋白的改变。结果玫瑰树碱以一种时间-剂量依赖的方式抑制膀胱癌T24细胞的增殖,表现为随着浓度的升高、作用时间的延长,对细胞的抑制作用越强。玫瑰树碱以浓度依赖的方式诱导T24细胞G2/M期周期阻滞,并分别上调和下调G2/M周期特异性蛋白cyclinB1和cdk1的表达,同时能上调p53mRNA和蛋白的表达。玫瑰树碱以浓度依赖的方式抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力,并能下调MMP-9mRNA和蛋白的表达水平,同时上调E-cadherin的表达水平。玫瑰树碱能上调ATM的磷酸化水平,上调 Cdc25C(Ser-216)和 Chk1(Ser-345)的磷酸化水平。当 ATM 被 siRNA 干扰后,Cdc25C(Ser-216)和Chk1(Ser-345)的改变均出现了逆转。结论玫瑰树碱以浓度-时间依赖的方式抑制T24细胞的增殖能力,并诱导其G2/M期周期阻滞,抑制T24细胞的运动能力。玫瑰树碱通过ATM-Chk1-Cdc25C-Cdk1和p53通路抑制T24细胞的增殖和诱导周期阻滞,通过EMT和MMPs抑制T24细胞的运动能力。