香菇多糖的分离纯化及其制剂的药学研究

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本论文以香菇子实体粗提物为原料,进行了以下三个方面的研究:1.考察了香菇子实体粗提物的理化性质,建立了香菇子实体粗提物中活性成分β-葡聚糖含量的测定方法,从而对原料质量进行控制。确定了α-淀粉酶、木瓜蛋白酶、α-1,4-葡萄糖水解酶的最适用量。用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-PAP)测定样品中葡萄糖的含量,测得香菇子实体多糖中β-葡聚糖的含量为3.70%~3.85%,样品平均回收率为98.7%,精密度RSD=1.61% (n=9)。香菇子实体干品以热水提取,乙醇沉淀,再经脱蛋白,脱色素处理。脱蛋白方法选用Sevag法,操作7次,蛋白基本除尽。选用大孔吸附树脂法对色素进行静态吸附,经过对三种树脂脱色效果以及多糖损失量的比较,最终选择用AB-8型树脂脱色。脱色液浓缩醇沉,沉淀以无水乙醇洗涤,真空干燥,再以蒸馏水加热溶解,进行Toyopearl HW-75柱层析,蒸馏水洗脱收集,合并糖峰部分,分别冻干后得到两个多糖组分XG1和XG2,收率分别为0.83%,1.20%。2.运用色谱、化学等方法对组分XG1、XG2进行了理化性质和初级结构分析。两组分经紫外扫描和高效凝胶色谱法检查纯度,均为均一性多糖。运用高效凝胶色谱法测定香菇子实体多糖的分子量。选择相应分离范围的高效凝胶色谱柱Shodex Ohpak SB-805 HQ、Shodex Ohpak SB-804 HQ、Shodex Ohpak SB-803 HQ串连,以NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液为流动相,示差折光检测器(RID)流速0.4mL/min,柱温30℃,测定香菇子实体多糖的分子量。采用薄层色谱法和气相色谱法测定了两个多糖组分的单糖组成;采用红外光谱和核磁共振、高碘酸氧化及Smith降解推知两多糖组分结构中单糖的组成和连接方式。结果表明:XG1的比旋度[α]20D=+0.25o,XG2的比旋度[α]20αD=+5.99o;两个组分的重均分子量分别为2.22×106、4.32×105道尔顿。两组分均由葡萄糖组成,以β-(1→3)糖苷键和β-(1→6)糖苷键构成糖链,结构相似。其中组分XG2的分子量及其分布与文献报道的香菇多糖一致。3.对XG2进行了质量、稳定性研究,制备了注射液并进行了安全性试验和稳定性研究。结果表明,XG2的各项指标均符合规定,强光、高热、高湿对XG2
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