论文部分内容阅读
【目的】认知功能障碍是阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD）导致患者生活质量下降最为突出的症状。本论文旨在研究雷公藤氯内酯醇（T4）长期给药是否能改善认知功能，利用体内和体外研究，从整体、细胞和分子等不同水平深入探讨可能的机制，为多靶点综合干预治疗AD的可能性进行有益探索。【方法】1.SPF级7月龄雄性SAMP8，按Y迷宫成绩随机分组，每组9～12只，分为溶媒对照组、T4处理组（0.25，1.0，4.0ug/kg）,以同系列的正常老化SAMR1小鼠溶媒组做为同龄P8小鼠的对照。腹腔注射给药，1次/日，共75天，用药结束后，应用Y迷宫、Morris水迷宫等行为学实验检测不同剂量T4作用下对动物学习记忆改善的情况。通过电生理技术检测海马区LTP、免疫组化技术检测基底前脑区ChAT表达情况，并采用Westernblot方法，检测突触相关的学习记忆相关蛋白的表达。2.利用稳定表达突变型APP695的N2a细胞（N2a/APP695），通过MTT实验确立药物安全剂量范围，分为N2a/APP695T4未处理组、T4处理组（1.25,2.5,5.0,10.0nM），并以野生型N2a（N2a/WT）细胞作为阴性对照。通过Elisa方法观察药物对Aβ的生成的影响，并借助Real-time PCR、Westernblot、激光共聚焦显微镜等方法，从PPARγ-BACE1通路探讨T4在β分泌酶途径中对APP剪切代谢和Aβ生成的影响及可能的分子机制。【结果】1.T4长期腹腔内注射给药能明显地改善老龄SAMP8小鼠的学习记忆能力，不仅使老龄SAMP8小鼠基底前脑区ChAT表达量增高，而且对高频电刺激引起的SAMP8小鼠离体海马脑片LTP有保护作用，并呈现一定浓度依赖效应，同时长期的腹腔内注射T4还未见明显毒副作用。2. T4能增加老龄SAMP8小鼠海马区突触相关蛋白PSD-95、p－NMDAR1、p－CaMKII、p－CREB/CREB以及BDNF表达水平，并通过NMDAR/CaMKII/CREB途径上调了BDNF的表达，从而改善突触的可塑性功能。3. T4能减少N2a/APP695细胞分泌Aβ1-42和Aβ1-40水平，并在一定范围内呈现浓度和时间依赖性，但对APP的表达无影响。T4可通过PPARγ调控BACE1转录，降低BACE1对APP剪切的活性，使APP通过BACE1酶切生成Aβ1-42和Aβ1-40减少。【结论】T4可通过NMDAR/CaMKII/CREB途径上调了BDNF的表达，改善突触可塑性。并且T4可通过激活PPARγ在转录水平调控等机制，调控BACE1活性改善APP代谢使Aβ生成减少。T4能针对病程多靶点治疗AD，减轻认知功能损害，而且长期应用没有明显的毒副作用。因此，T4有望成为理想的安全有效的AD防治药物。