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目的:脓毒症时严重的炎症反应和凝血系统激活将导致内皮细胞屏障破坏和内皮细胞功能失调,是导致微循环衰竭及器官功能衰竭的主要原因。多糖包被是覆盖于全身血管内皮细胞内侧的一层带负电荷的纤维网,对内皮细胞起到保护作用,多糖包被和内皮细胞是隔离病原菌和组织器官的第一道屏障,在脓毒症过程中起到关键作用。生理状态下,多糖包被具有抗血栓形成、抑制细胞粘附、防止组织水肿等多种功能。在脓毒症早期被破坏后内皮细胞暴露,促进白细胞粘附和凝血激活。乙酰肝素酶通过多种途径降解内皮细胞多糖包被,导致内皮细胞破坏,炎症因子生成和释放增多、凝血系统激活和组织水肿,微循环障碍,多脏器功能衰竭。普通肝素除具有传统的抗凝作用外,还具有重要的免疫调节作用,在抑制促炎因子的产生和释放中起到重要作用。大量基础研究及临床研究已经证实普通肝素可以保护脓毒症内皮细胞多糖包被,然而普通肝素是否通过减少肝素酶表达,从而保护多糖包被,进而发挥对脓毒症的保护作用,目前未见报道。因此有必要开展动物和细胞研究进一步证实。为普通肝素在脓毒症患者中的作用及其作用机制提供理论依据。本研究旨在探讨普通肝素对脓毒症内皮细胞多糖包被及凝血功能的影响,并探讨其作用机制。方法:1.组织样本:50只8-10周雄性C57BL/6来源于中国医科大学实验动物中心。其中20只小鼠进行经典盲肠结扎穿孔术（CLP）,术后观察脓毒症表现至第7天,统计20只小鼠的生存率。符合CLP导致脓毒症标准并病死率达到50%提示造模成功。再对30只小鼠进行随机实验分组,共分为5组,分别是:对照组,经鼠尾静脉注射等剂量的生理盐水。CLP组,异氟醚麻醉下行CLP术,制作脓毒症模型。CLP+普通肝素（UFH）组,CLP造模后1小时经鼠尾静脉注射UFH 8 U/20g（剂量为课题组前期研究验证）。CLP+肝素酶（HPA）抑制剂组,CLP造模前腹腔注射HPA抑制剂20 mg/kg（剂量为课题组前期研究验证）。CLP+UFH+HPA抑制剂组,CLP造模前腹腔注射HPA抑制剂20 mg/kg,造模后1小时经鼠尾静脉注射UFH 8 U/20g。CLP造模及生理盐水注射后4小时（时间点选取参考课题组前期研究）取肺组织。2.通过苏木素伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色评估肺组织病理学评分。3.通过测肺干湿比和肺水含量百分比量化肺水肿程度。4.细胞培养:购买的原代人肺微血管内皮细胞（HPMECs）株分为5组。对照组,加等量PBS。脂多糖（LPS）刺激组,应用LPS 10μg/ml（剂量为课题组前期研究验证）刺激细胞。LPS+UFH组:LPS 10μg/ml刺激后1小时给予UFH 10 U/ml（剂量为课题组前期研究验证）,加入UFH后3小时收集细胞。LPS+HPA抑制剂组,加HPA抑制剂150μg/ml（剂量为课题组前期研究验证）,同时立即加LPS 10μg/ml。LPS+UFH+HPA抑制剂组:加入HPA抑制剂150μg/ml后立即加入LPS 10μg/ml,等待1小时后给予加入UFH 10 U/ml。加入LPS或PBS后4小时收集细胞。5.通过实时定量聚合酶链反应（q RT-PCR）检测肺组织中组织因子（TF）,纤维蛋白原（Fib）,白介素-1β（IL-1β）,多糖包被主要膜蛋白成分syndecan-1及HPA m RNA水平。通过q RT-PCR检测各组HPMECs中TF,IL-1β,syndecan-1及HPA m RNA水平。6.免疫荧光标记肺多糖包被成分syndecan-1及HPA蛋白表达水平。免疫荧光标记各组HPMECs中syndecan-1及HPA蛋白表达水平。用Image J软件行荧光强度分析。7.通过Western Blot检测syndecan-1、HPA蛋白在肺内及各组HPMECs中的表达水平。8.统计学分析采用SPSS 26.0软件进行统计学分析,用Graph-Pad Prism 8.0软件作图。计量资料采用均数±标准差（mean±SD）表示,组间均数比较采用重复测量方差分析或单因素方差分析（one-way ANOVA）,组间两两比较方差齐时采用最小显著性差异法（LSD-t检验）,方差不齐时采Brown-Forsythe和Welch ANOVE检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:CLP导致小鼠肺损伤和肺水肿的发生,肺HPA生成增多,肺syndecan-1 m RNA和蛋白表达下降,肺组织TF、Fib和IL-1βm RNA表达增加,提示凝血和炎症反应激活。HPA抑制剂减轻CLP肺损伤和肺水肿的严重程度,抑制肺syndecan-1降解,减少肺组织TF和Fib表达,提示HPA促进多糖包被降解,进而导致凝血活化。UFH减轻了CLP所致的肺损伤和肺水肿,降低了CLP导致的肺HPA m RNA和蛋白的表达,增加CLP组肺syndecan-1 m RNA和蛋白水平,抑制了CLP组肺TF、Fib和IL-1βm RNA的表达,提示UFH通过抑制HPA的表达保护多糖包被,进而抑制凝血活化和炎症反应。上述结果提示UFH可能通过HPA途径保护CLP诱导的肺多糖包被损伤。在细胞实验中,UFH抑制LPS诱导的HPMECs的HPA高表达,增加syndecan-1的m RNA和蛋白水平,降低了TF和IL-1β的表达,提示UFH通过抑制HPA的表达保护内皮细胞多糖包被,进而抑制凝血和炎性反应的活化。上述结果提示UFH可能通过肝素酶途径保护LPS诱导的内皮细胞多糖包被损伤。结论:脓毒症时HPA增加内皮细胞多糖包被脱落进而引起凝血激活和炎症反应。普通肝素可能通过抑制HPA的表达来抑制多糖包被的降解。