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[目 的]CTA是具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原,只在肿瘤组织和生殖如睾丸、胎儿卵巢组织中表达,在其他正常组织中不表达。GAGE是CTA中重要的一类抗原,近年己经有多个GAGE家族成员在恶性肿瘤中进行研究,被证实在恶性肿瘤诊断中有一定价值。HCC是一种起病较为隐匿,但发病率和死亡率都不容小觑的消化道肿瘤。GAGE7作为GAGE家族成员之一,在HCC中的表达和发挥的作用目前鲜有报道。本研究旨在揭示GAGE7在HCC中的表达情况,探讨GAGE7在HCC中的表达与肿瘤免疫浸润和预后的关系,并在肝癌细胞系中对GAGE7功能进行初步的验证。[方法]1.筛选2016年1月至2018年12月间本院诊断的HCC患者89例,选取癌及癌旁组织石蜡标本,应用IHC方法检测GAGE7蛋白在HCC中的表达情况,结合临床病理参数进行相关性分析,并与患者术后随访资料进行总生存和无进展生存分析;收集2019年1月至2021年12月本院术中冰冻送检的新鲜HCC样本及配对癌旁正常肝组织29例,qPCR方法检测GAGE7在mRNA水平的表达情况,分析GAGE7在癌与癌旁中的表达差异;收集2021年9至12月本院术中冰冻送检的新鲜HCC样本及配对癌旁正常肝组织14例,Western blot法检测GAGE7的蛋白表达情况。2.对收集到的89例HCC石蜡样本进行CD3、CD8的IHC实验,计算肿瘤中心(CT)区域和浸润边缘(IM)区域CD3+和CD8+T细胞的分布密度和免疫评分,分析与HCC患者生存期、临床病理参数及GAGE7表达的相关性。3.选取肝癌Hep-G2和人正常肝HL-7702细胞系,通过qPCR和Western blot,检测GAGE7在细胞系中mRNA和蛋白表达情况。用下调GAGE7表达的慢病毒转染Hep-G2细胞系,筛选稳转株,通过CCK-8、凋亡实验和细胞划痕实验检测下调GAGE7表达的肝癌细胞相关生物学行为变化。[结果]1.HCC组织中GAGE7的mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁组织:89例HCC石蜡组织中GAGE7蛋白表达量(77221.056±50288.332)显著高于癌旁组织(26819.821±11801.387)(P<0.0001);29例新鲜HCC组织中GAGE7 mRNA的表达量(6.327±12.725)显著高于相对应的癌旁组织(1.101±1.246)(P<0.01);14例新鲜肝癌组织中GAGE7的蛋白表达量(0.2978±0.2168)高于对应的癌旁组织(0.1698±0.2231)(P<0.05)。2.GAGE7蛋白在HCC肿瘤最大径>5cm、高组织学分级(Ⅲ-Ⅳ)、高Ki67(≥10%)指数、血清AFP阳性、P53蛋白阳性(≥10%)、发生血管侵犯的组别中表达明显增高(P<0.05);在与不同性别、年龄、TP53、T分期、结节个数、乙肝、卫星结节、MVI、有无肝硬化的参数比较中,GAGE7蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。3.K-M生存分析显示GAGE7高表达与HCC患者不良预后相关。GAGE7高表达组HCC患者术后总生存期和无进展生存期都低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析中GAGE7、肿瘤最大径、患者年龄、MVI、组织学分级、AFP、T分期与患者术后总生存期相关(P<0.05),其中GAGE7、MVI分级是影响HCC患者术后总生存率的独立危险因素;GAGE7、结节个数、MVI、T分期、P53蛋白、血清AFP、卫星结节与患者术后无进展生存期相关(P<0.05),其中GAGE7、结节个数、MVI分级和血清AFP水平是影响HCC患者术后无进展生存率的独立危险因素。4.比较HCC中CT和IM区域的两种肿瘤浸润淋巴细胞密度结果显示:①只有CD8+T细胞的IM区域密度高于CT区域(P=0.0377),CD3+T细胞IM区域高于CT区域CD8+T细胞密度(P<0.0001),其他CT或IM区域CD3+T或CD8+T细胞密度之间比较均无显著性差异(P>0.05);②CT区域CD8+T细胞低密度组患者的总生存期高于高密度组(P=0.02),其他CT或IM区域CD3+T或CD8+T细胞与HCC患者术后总生存期无相关性(P>0.05);③临床病理参数中,伴有肝硬化的HCC组的IM区域CD3+和CD8+T细胞密度都低于不伴有肝硬化的HCC组(P<0.05):HBV阳性患者IM区域CD8+T细胞密度低于HBV阴性HCC组(P<0.05);其他临床病理参数的免疫细胞密度比较均无显著性差异(P>0.05);④CT或IM区域的CD3+或CD8+T细胞密度不同组间GAGE7表达比较均未获得统计学差异(P>0.05)。5.CD3+/CD8+T细胞高评分组GAGE7表达与低评分组比较无统计学差异(P>0.05);临床病理参数中只有伴有肝硬化的肝癌患者CD3+/CD8+T细胞免疫评分低于不伴有肝硬化的肝癌组(P<0.05),其他参数中免疫评分间比较无统计学差异(P>0.05);CD3+/CD8+T细胞高评分组与低评分组患者的总生存和无复发生存没有统计学差异(P>0.05)。6.Hep-G2肝癌细胞系中GAGE7的mRNA和蛋白表达均显著高于HL-7702正常肝细胞系;下调GAGE7基因表达后的肝癌细胞增殖率下降(P<0.05),凋亡率上升(P<0.05),细胞划痕愈合率降低(P<0.05)。[结论]1.HCC中,GAGE7的mRNA和蛋白表达水平都增高,提示GAGE7可能参与了 HCC的发生发展。2.GAGE7高表达与HCC患者肿瘤大小、组织学分级、Ki67指数、血清AFP、P53蛋白、血管侵犯(影像学)相关;GAGE7高表达HCC患者总生存和无进展生存期较短,GAGE7是HCC患者术后不良预后指标。3.GAGE7和MVI是影响HCC患者术后总生存率的独立危险因素;GAGE7、结节个数、MVI和血清AFP水平是影响HCC患者术后无进展生存率的独立危险因素。4.GAGE7可能不是主要通过调节HCC患者肿瘤免疫浸润影响HCC的发生发展。5.GAGE7可能通过促进肝癌细胞增殖、迁移,抑制肝癌细胞凋亡等机制参与了肝癌的发生发展。