SALL4在原发性肝癌中的表达及其纳米荧光检测体系的构建

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lijingbo1985
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目的:研究人类婆罗双树样基因4(Saplt-like 4,SALL4)在肝癌发生中的作用,开发新型高效聚集诱导发光(Aggregation induced emission,AIE)有机荧光染料,构筑高效非标记型荧光传感体系,从而实现生物活性分子的高灵敏度、高选择性的非标记荧光传感和检测。以期更好地指导临床的早期诊断、治疗方案的选择。研究对象与方法:(1)研究对象:从我院组织标本库中选取近年来临床确诊原发性肝癌患者40例。(2)方法:对入组患者的临床资料进行回顾性分析,记录人口学数据(年龄,性别等),实验室数据(天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶等),病理数据(肿瘤大小,肿瘤分期,以及有无脉管浸润等)等。(3)选取可行免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检查的足够组织标本病例及临床资料完整病历,对上述病例标本进行苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)重新评定病理,确定癌组织、癌旁组织。以SALL4单克隆抗体作为免疫组织化学染色一抗进行染色,确定SALL4在原发性肝癌中的表达情况。(4)依托吉林大学超分子结构或材料国家重点实验室,设计开发新型AIE分子。将具有AIE特性的分子作为发光基元与疏水基团和生物相容性好的亲水基团偶联,制备新型具有AIE特性有机聚合物。以合成的高效AIE荧光染料为基础,选择SALL4抗体进行修饰,与两亲性基团结合,作为识别单元,在细胞中完成检测。(5)对前述病例标本再次行纳米荧光粒子免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色,在荧光显微镜下以相同曝光时间进行图像采集,计算荧光强度,对结果行统计学分析。结果:(1)将SALL4阳性染色分级定义为:1)弱阳性:1-30%的细胞染色,记为1分,2)中阳性:31-50%的细胞染色,记为2分,3)强阳性:51-80%的细胞染色,记为3分,4)极强阳性:>80%的细胞染色,记为4分。免疫组织化学染色示肝癌组织和癌旁组织间,SALL4表达存在显著差异(P<0.05)。(2)免疫组织化学染色中,SALL4表达与年龄、性别、病因、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)水平、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平、胆碱酯酶(Cholinesterase,CHE)水平、血清白蛋白(Albumin,ALB)水平、总胆红素(Total bilirubin,TBi L)水平、凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)水平、血小板(Platelet,PLT)水平、肌酐值、终末期肝病模型(Model for end-stage liver disease,MELD)评分、甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)水平、肿瘤最大直径、肿瘤数目、T分期、组织学分化、是否存在脉管侵犯及神经侵犯、肝硬化存在与否等无统计学相关性。(3)通过自组装方法制备了基于两亲性聚合物DSPE-PEG-NHS和聚集诱导发光NDSA的纳米粒子,并进一步在表面修饰SALL4基因编码蛋白抗体,获得具有明亮橙色荧光的纳米粒子NDSA@SALL4。该纳米粒子在水中具有较强的荧光发射,其发射峰位于559nm处,荧光量子产率为2.89%。(4)纳米粒子NDSA@SALL4不仅可以靶向Hep G2肝癌细胞,而且可与SALL4基因编码的蛋白有效结合,富集在细胞核中,发出明亮的橙黄色荧光。(5)纳米粒子NDSA@SALL4经免疫荧光染色处理后,共聚焦显微镜下可见靶向肝癌组织。免疫荧光染色中,肝癌组织和癌旁组织间,SALL4表达存在显著差异(P<0.05)。(6)免疫荧光染色中,SALL4表达与年龄、性别、病因、ALT水平、AST水平、CHE水平、ALB水平、TBi L水平、PT水平、PLT水平、肌酐值、MELD评分、AFP水平、肿瘤最大直径、肿瘤数目、T分期、组织学分化、是否存在脉管侵犯及神经侵犯、肝硬化存在与否等无统计学相关性。(7)免疫荧光染色在判断组织类型时,灵敏度、特异度较免疫组织化学染色更为优越。结论:(1)两种检测方法均显示,相对于癌旁组织,SALL4在肝癌组织中高表达。(2)采取的两种检测手段均显示,SALL4表达与否和年龄、性别、病因、ALT水平、AST水平、CHE水平、ALB水平、TBi L水平、PT水平、PLT水平、肌酐值、MELD评分、AFP水平、肿瘤最大直径、肿瘤数目、T分期、组织学分化、是否存在脉管侵犯及神经侵犯、肝硬化存在与否等未见统计学相关性。(3)纳米粒子NDSA@SALL4具有优异的发光特性和良好的生物相容性。在该纳米粒子表面修饰肝癌细胞靶向的SALL4抗体后,荧光纳米粒子可以特异性地靶向肝癌细胞及肝癌组织,并在细胞核富集,为早期检测肝癌细胞提供了可能。(4)纳米粒子NDSA@SALL4对原发性肝癌组织免疫荧光染色的灵敏度、特异度优于免疫组织化学染色。
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