目的:探讨M受体激动剂西维美林及阻滞剂4-DAMP对胆管癌神经浸润的具体调节作用,探讨其可能的作用机制,寻找阻断胆管癌早期发生周围神经浸润的新方法,为提高胆管癌患者手术切除率及预后提供有效的治疗途径。方法:1.胆管癌细胞FRH0201及RBE细胞培养;2.应用RT-PCR和WESTERN BLOT分别检测以上两种胆管癌细胞中的M3受体基因表达情况;3.CHRM3腺病毒细胞转染;4.胆管癌体外神经浸润模型的建立;5.体外模型培养液的选择;6.镜下观察各组两种胆管癌细胞粘附、浸润神经纤维的情况。共培养72小时后,统计与神经黏附的肿瘤细胞数,并对结果进行统计学处理。结果:1、通过应用RT-PCR和WESTERN BLOT分别检测以上两种胆管癌细胞中的M3受体基因表达,得出RBE胆管癌细胞中M3受体基因相对高表达,而FRH0201中M3受体基因相对低表达;2、M3受体基因成功转染以上两种胆管癌细胞,并获得稳定表达;3、成功构建DRG/神经-FRH0201细胞共培养体系和DRG/神经-RBE细胞共培养体系中,FRH0201和RBE细胞都能够融解并穿透周围基质,并贴附于背根神经所发出的神经纤维生长。4、在DRG/神经-胆管癌细胞共培养体系中,共培养72小时后,与对照组和西维美林加4-DAMP组相比,西维美林可明显促进胆管癌细胞穿透基质、黏附神经,差异均有统计学意义,P值均<0.05;4-DAMP组与对照组相比差异无统计学意义,P 值>0.05。结论:胆管癌细胞可能表达M3毒蕈碱型乙酰胆碱受体,其受体激动剂可促进胆管癌的神经侵袭,为胆管癌神经侵袭的发生、发展提供实验依据。