【摘 要】
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人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是中国著名中药,可分为野山参、移山参和栽培参,不同种质、不同年份以及不同环境条件下生长发育的人参其品质、药效与市场价格相差很大.野山参
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人参(Panax ginseng C.A.Meyer)是中国著名中药,可分为野山参、移山参和栽培参,不同种质、不同年份以及不同环境条件下生长发育的人参其品质、药效与市场价格相差很大.野山参、移山参和栽培参之间形态上无明显差异,化学成分也无太大的差别,如何准确的鉴定不同的人参一直是困扰人参产业的问题.利用DNA分子标记进行人参种质鉴定,将能够更加客观准确的区分栽培参与野山参,揭示人参品质差异的本质原因并且更有效的保护和利用人参资源.该研究采用直接扩增片段长度多态性(DALP)分子标记技术确定野山参和栽培参之间的特征性差异,并对人参的26S-18S核糖体DNA的基因间隔区(IGS)的结构特征及其多样性做了探讨.实验表明,DNA的质量是影响人参DNA分子鉴定稳定性的关键因素,该研究优化改进的高盐SDS法能从5mg微量人参须根材料中提取高质量DNA.通过摸索和优化DALP-PCR实验体系,对十个野山参和五个栽培参(包括一个移山参)构建了DALP指纹图谱.图谱显示野山参的遗传多样性远高于栽培参.栽培参生成一条200-bp特征性条带,野山参生成一条250-bp特征性条带.200-bp的特征性条带被分离后测序,根据其序列设计了特异性引物PC3和PC4.通过对DALP图谱上15个人参样本及其他106个人参样本的检测,显示出引物PC3和PC4对栽培参有很高的特异性.进一步设计的用两对引物PCR检测人参的方法被证明可以有效的区分栽培参和野山参.该研究提供了一种基于多元的PCR反应来快速、有效的鉴定那些划分困难的中草药的思路.对人参的26S-18S核糖体DNA的基因间隔区(IGS)的研究分析表明,人参核糖体26S-18S的IGS序列是目前所得到的高等植物中最短的IGS序列,已得到的序列长度有631bp,1101bp,1282bp,1437bp.核糖体26S基因缺失50bp或330bp;核糖体26S缺失50bp的IGS长度小于1k,没有重复区;核糖体26S缺失330bp的IGS序列长度大于1k,在NTS端有长约150bp和160bp的两段序列间隔重复,重复次数不同.所有的lGS序列在重复区外都高度相似.
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