近年来新型抗真菌药物的研发成为研究热点之一。本实验室从土壤中筛选得到一株Bacillus amyloliquefaciensBW-13,其产生的抗真菌活性物质对几丁质合酶缺陷型酿酒酵母菌株的抑制作用比野生型菌株更强,可能对几丁质合酶具有特异性抑制作用。通过单因素实验和均匀设计对BW-13菌株培养基和培养条件进行优化,得到最适发酵产抗真菌物质条件为:玉米粉40.0 g/L,蛋白胨为6.7g/L,氯化锰5 mg/L,接种量4%,初始发酵pH 5.0,温度28 ℃,培养144h,优化后BW-13发酵液的效价由初始的3 838 U/mL提高到31972 U/mL,提高了 8.33倍。实验通过纸电泳表明BW-13产生的抗真菌物质具有弱酸性,通过pH纸层析说明该物质符合两性抗生素的特征,通过杰克八溶剂法判断该物质属于酸性水溶性抗生素,通过薄层色谱极性分析判断该物质在乙醇和甲醇等极性较大的有机溶剂和水中溶解度较大,该活性物质能够使用茚三酮进行显色,最佳展开剂为正丁醇:乙酸:水(3:1:1),并得到三个活性斑点,这些性质与某些氨基酸或小肽类似。该抗真菌物质的分离纯化步骤如下:利用盐酸调发酵液pH至2.0沉淀杂质,得率为137%;使用S-8大孔吸附树脂除去发酵液中大部分色素,得率为65%;使用HZ-011阳离子交换树脂(0.3 mol/L氨水洗脱)进一步纯化,得率为21.8%。分离纯化后抗真菌物质效价比与初始发酵液效价提高4.85倍,提高至14 220 U/mL,最终得率为19.4%。最后采用RP-HPLC分析,条件为乙腈:水(90:10),检测波长为220nm,得到一个纯度为84.86%的峰。这些结果为进一步分离纯化研究打下了基础。