犬下颌骨牵张成骨新骨形成相关microRNA的表达及差异性分析

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目的:使用高通量microRNA测序方法研究犬下颌骨牵张成骨过程中及犬快速发育期内与成骨、成血管作用相关的microRNA的差异性表达和意义,预测差异性microRNA靶基因,探索未知的novel microRNA并通过GO富集、KEGG富集分析进行microRNA功能分类。方法:设立7组实验组分别为固定0周组(DO-0)、固定2周组(DO-2)、新生犬组(P-0)、幼犬2周(P-2)、4周(P-4)、8周(P-8)组及对照组(Normal)。固定0周组和固定2周组中分别选取3只健康成年杂种犬,体重约15公斤,于其右侧下颌骨施行下颌骨牵张成骨术。于右下颁下缘口外做切口并剥离至骨面,在犬右下颌第一磨牙远中垂直截断下颌骨并于颊侧安装内置牵张器将截断两断端固定。间歇期7天后开始以1mm/天速度将右下颌骨向近中方向牵张,牵张期7天共预计牵张7mm后牵张结束,处死即刻牵张组实验犬并收集右下颌骨牵张区标本。固定2周组完成牵张后固定2周,期间拍摄锥形束CT观察成骨情况,固定期结束处死动物并收集右侧下颌骨牵张区新生标本,记录标本大体观。新生犬组选择3只出生后30分钟内新生幼犬,观察无明显缺陷后纳入实验组。幼犬2周、4周、8周组分别选取3只同种出生2、4、8周健康幼犬纳入实验组。对照组选取3只健康成年杂种犬,体重约15公斤。处死新生犬组、幼犬2、4、8周组及对照组并收集右下颌骨标本。将7组实验组标本进行高通量microRNA测序检测。结果:1)大体观:固定0周组及固定2周组实验犬成功完成右下颌骨牵张成骨过程,伤口愈合良好,无感染,生命体征良好。牵张器与固位钉无松动脱落。右下頜骨牵张区冉被增生骨膜和结缔组织包绕,未见明显骨组织形成;2)锥形束CT检查:牵张组实验动物右下颌骨牵张间隙边界清楚,呈低密度影,均为结缔组织充填其中;3) HE染色:固定2周组较对照组相比骨小梁增粗,期间分布肉芽组织较多,血管及细胞成分更为丰富;4) miR-142与成骨细胞矿化功能密切相关,固定0周组中miR-142表达量显著高于其余各实验组,miR-142在犬出生至生长发育高峰期到来表达量逐渐增高。miR-142可能为造成牵张过程中成骨速度加快的原因之一;5)预测PSEN1为miR-142在促进成骨过程中的靶基因。结论:miR-142在牵张成骨及生长发育快速期均有表达上调,上调的结果可能正调控其靶基因PSEN1,从而激活Notch、Wnt信号通路促进成骨。
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