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白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是近年发现的一种细胞因子,具有诱生IFN-γ、促进T细胞增殖分化等生物学功能,在宿主防御、抗变态反应、抑瘤抗瘤等方面具有重要作用。同时IL-18作为天然的免疫调节剂和疫苗佐剂克服了使用传统药物成本高,副作用大等缺点,是一种可以替代传统疗法的新型免疫调节剂,具有很大的应用前景。目前国内外对IL-18的研究主要集中在人和鼠等哺乳动物,而对鸡IL-18的研究,特别是增强免疫方面的报道较少。故此,本研究在对酵母表达系统中表达的鸡IL-18与新城疫病毒HN基因融合蛋白进行表达条件优化、纯化的基础上,分别对不同形式IL-18和HN联合免疫雏鸡的免疫应答情况进行了比较检测,为进一步研究鸡IL-18的生物学功能及其在疫苗中的应用奠定基础。本研究对已构建好的携带有IL-18与HN融合基因的重组酵母菌遗传稳定性进行了分析,筛选优化了其最佳表达条件,实现了融合基因在酵母中高效表达;表达蛋白经纯化、定量后分别用Western bloting、MTT等方法在体外对其生物学活性进行分析。结果表明,该重组工程菌能稳定地表达鸡IL-18-HN融合蛋白。其在培养液pH6.5、甲醇诱导浓度1.5%、诱导温度30℃的条件下诱导156h,目的蛋白的表达量最高,为400mg/L。纯化后的体外活性检测试验表明,其表达的鸡IL-18-HN融合蛋白具有明显的刺激淋巴细胞增殖的活性。同时将含有鸡IL-18-HN融合基因的重组质粒PSK-HN-IL18,应用KpnⅠ和NotⅠ双酶切,切出HN-IL18融合基因,回收并连接经相同酶切的真核表达载体pcDNA3,成功构建了含有HN和IL-18融合蛋白基因的pcDNA3-HN-IL18真核表达载体。在上述工作基础上,对鸡IL-18-HN融合蛋白免疫效果通过实验鸡进行了检测。试验共分6组,即融合蛋白组、HN蛋白组、真核表达的ChIL-18组、HN蛋白+真核表达的ChIL-18组、pcDNA3-HN-IL18组和空白对照组,每组50只,正常饲养程序饲养至8日龄时各组进行免疫接种,试验组在用颈部皮下注射方式分别进行不同类型的新城疫免疫,每只剂量50μg,空白对照组注射相同剂量的生理盐水,pcDNA3-HN-IL18组每只剂量20μg,12日龄用同样方式进行二免,分别于免疫后的第4d,7d,14d,21d,28d对其血清的抗体效价、外周血的T淋巴细胞转化水平及其NO分泌、免疫器官指数及免疫器官T淋巴细胞数和免疫器官IgG抗体生成细胞进行测定,并在26日龄时每组取20只用于动物攻毒保护试验。结果表明:IL-18和HN蛋白联合使用可以明显增强新城疫的免疫效果。与单独的HN组相比,联合免疫组试验雏鸡血清中抗体水平、T淋巴细胞转化水平和巨噬细胞分泌NO的能力显著提高,较好促进了免疫器官的生长发育和成熟,免疫器官T淋巴细胞数量和IgG抗体生成细胞数量明显增多,融合蛋白的使用进一步强化了这种作用。