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目的:局灶性节段性肾小球硬化症（FSGS）是最为常见的成人肾病综合征。FSGS的发病机制目前仍然不明确,足突细胞损伤在FSGS的发病中起重要作用。目前没有有效的治疗药物。盐酸阿霉素可以诱导小鼠发生FSGS,可以作为研究该疾病的理想动物模型。microRNAs是一类小非编码RNA,参与肾脏发育和肾脏疾病的形成。我们之前研究结果显示上调人足细胞microRNA（miR）-150表达可以增加促纤维化蛋白表达,减少抗纤维化细胞因子信号转导抑制物1（SOCS1）表达。我们的目的是明确miR-150抑制剂是否可以缓解阿霉素诱导的FSGS小鼠的肾小球损伤及其机制。我们给予ADR诱导FSGS动物模型LNA-anti-miR-150,观察各时间点尿ACR变化及6周血清白蛋白、血脂、肾功能及病理,明确LNA-anti-miR-150治疗改善FSGS临床指标及病理改变。探讨LNA-anti-miR-150通过抑制FSGS肾脏内miR-150表达,促进抗纤维化因子表达,减少抗纤维化因子表达。并在小样本FSGS患者肾活检标本中验证FSGS中miR-150表达升高。探索miR-150是否可成为FSGS临床治疗的新靶点,为LNA-anti-miR-150治疗FSGS提供理论依据。研究方法:1.选用12周龄的雄性Babl/c小鼠,经阴茎静脉给予注射盐酸阿霉素,剂量为10.5mg/kg。在给药后5天、2周、4周、6周留取小鼠尿液。检测尿液白蛋白以及尿液肌酐,计算尿白蛋白/尿肌酐（ACR）,明确ADR可以导致Balb/c小鼠尿液蛋白排泄增加。第6周收集静脉血样及肾组织,化验外周血血清肌酐、血清白蛋白、血清甘油三酯、血清总胆固醇及血清低密度脂蛋白胆固醇。明确ADR导致Balb/c小鼠产生低蛋白血症及高脂血症等肾病综合征表现。一部分肾组织提取RNA,利用RT-qPCR技术分析肾脏内miR-150的表达,明确其是否在FSGS疾病中表达升高。另一部分肾组织用于病理包埋切片,行PAS及Masson三色染色,旨在明确ADR导致Balb/c小鼠出现FSGS病理改变。选取诊断FSGS患者活检肾组织8例,正常对照者7人。收集患者基本信息,包括年龄及性别,收集患者临床信息,包括病理类型,eGFR,24小时尿蛋白定量,血白蛋白,血总胆固醇,硬化肾小球数/总的肾小球数。正常对照信息包括年龄,性别,eGFR,尿液蛋白,尿比重,血清白蛋白。肾组织提取RNA,利用RT-qPCR技术分析肾脏内miR-150的表达,明确FSGS患者miR-150表达增多。肾脏组织采用PAS,Masson染色,观察FSGS光学显微镜下改变。制作电子显微镜切片,观察电子显微镜下改变。行WT-1荧光染色,观察FSGS患者的足突细胞损伤。行SOCS1免疫荧光染色,观察在肾小球内SOCS1蛋白表达高低。利用荧光标记的原位杂交技术（FISH）定位miR-150表达于肾小球。2.利用12周龄雄性Babl/c小鼠,经皮下注射FAM标记的锁核苷酸miR-150抑制剂（FAM-LNA-anti-miR-150）2mg/kg及4mg/kg,6小时后收集肾组织,制备冰冻切片,荧光显微镜观察FAM-LNA-anti-miR-150肾内表达情况,明确miR-150抑制剂可以在肾脏吸收。利用12周龄雄性Babl/c小鼠,经阴茎静脉内注射盐酸阿霉素10.5mg/kg,制作FSGS动物模型,给予LNA-anti-miR-150或scrambled LNA2mg/kg隔日一次皮下注射。注射后第5天、2周、4周、6周留取尿液。检测尿液白蛋白及尿液肌酐,计算尿白蛋白/尿肌酐（ACR）。第6周收集外周静脉血。检测外周血清肌酐、血白蛋白、血总胆固醇及血低密度脂蛋白胆固醇,检测肝功能ALT及体重。第6周收集肾脏,一部分肾组织提取RNA,利用RT-qPCR技术分析各组肾脏内miR-150,促炎因子Il6,Ifnγ,Tnfα,促纤维化因子Tgfβ1,αSma,Fn,抗纤维化因子socs1表达。一部分肾脏提取蛋白质,利用Western blot技术检测足细胞特异性蛋白WT-1,促纤维化蛋白TGFβ1,αSMA,FN,抗纤维化蛋白SOCS1,巨噬细胞标记蛋白F4/80。一部分肾组织用于病理包埋切片,行PAS及Masson三色染色,最后一部分肾组织用于制作冰冻切片,行免疫荧光染色,观察WT-1,TGFβ1,αSMA,FN,SOCS1,CD3,CD4及CD8。明确LNA-anti-miR-150的肾脏保护作用。结果:1.ADR注射5天时,Balb/c小鼠出现蛋白尿,随后蛋白尿逐渐增多。6周时Balb/c小鼠出现低蛋白血症,血脂异常症,符合肾病综合征表现,病理改变符合FSGS。肾脏miR-150表达增加,说明ADR可导致Balb/c小鼠发生FSGS,且FSGS小鼠肾脏miR-150表达增加。与正常对照组相比,FSGS患者存在低蛋白血症,血脂异常症,大量蛋白尿。光镜及电镜符合FSGS表现。FSGS患者的肾脏组织miR-150表达增高,利用荧光标记原位杂交技术（FISH）定位miR-150高表达于肾小球。FSGS患者肾小球中WT-1蛋白表达减低,存在足突细胞损伤。FSGS患者肾小球SOCS1蛋白表达减少。2.Balb/c小鼠给予FAM-LNA-anti-miR-150皮下注射6小时后可在肾小球内检测到FAM-LNA-anti-miR-150表达,且呈剂量依赖性,2mg/kg FAM-LNA-anti-miR-150即可发挥作用。FSGS小鼠给予LNA-anti-miR-150处理后,与正常对照组相比,肝功能ALT及体重无差异,说明其安全,无肝毒性及系统毒性。与对照组相比,蛋白尿,低蛋白血症及高脂血症均得到缓解,肾小球损伤减轻。与对照组相比,LNA-anti-miR-150使FSGS小鼠促炎因子Il6,Ifnγ,Tnfα,促纤维化因子Tgfβ1,αSma,Fn表达减低,抗纤维化因子socs1表达增加,使促纤维化蛋白TGFβ1,αSMA,FN表达减低,抗纤维化蛋白SOCS1表达增多。使足细胞特异蛋白WT-1表达增加,CD3阳性淋巴细胞浸润减少,而对巨噬细胞无影响。结论:1.ADR诱导Balb/c雄性小鼠局灶节段性肾小球硬化症肾脏miR-150表达水平上调。2.FSGS患者的肾miR-150表达增多,且高表达于肾小球3.FSGS患者肾小球SOCS1蛋白表达减少。4.LNA-anti-miR-150可通过抑制miR-150,降低炎症因子Il6,Ifnγ,Tnfα,降低促纤维化因子TGF-β1,αSMA,FN,增加抗纤维化因子SOCS1,减少T细胞浸润,改善炎症反应,减轻肾组织纤维化。