马拉硫磷(Malathion,MT)作为低等急性毒性的有机磷农药广泛应用于农业生产。研究发现MT对于神经、生殖及免疫等系统具有毒性作用,其毒性作用主要由氧化应激诱导。核桃仁中富含多酚类化合物,是天然抗氧化剂的重要来源,能通过抑制自由基生成、清除活性氧或提高抗氧化酶活性等途径缓解氧化应激。本研究以小鼠脾淋巴细胞为切入点,在研究MT对脾淋巴细胞诱导的毒性作用的基础上,探讨了核桃多酚提取物(Walnut Polyphenol Extract,WPE)对MT所致毒性的缓解作用及其作用机制。主要研究结果如下:(1)WPE缓解MT对脾淋巴细胞增殖诱导的毒性作用。用MT与脾淋巴细胞共培养48 h,通过细胞增殖分析实验测定细胞活力。结果显示MT显著抑制细胞生长,当用1.0、5.0和10.0 μg/mL浓度的WPE分别与农药共处理脾淋巴细胞的结果显示,WPE以浓度依赖的方式提高细胞活力,当WPE的作用浓度为1 μg/mL时,显著缓解MT的毒性作用,当作用浓度为10 μg/mL时,暴露于MT的脾淋巴细胞活力可恢复至对照组水平。(2)WPE缓解MT对脾T/B淋巴细胞毒性作用。用有丝分裂原,刀豆蛋白A或脂多糖处理细胞,分别使其中T或B淋巴细胞大量增殖。在有丝分裂原的刺激作用下,使细胞暴露于含MT的培养基中48 h,用细胞增殖分析实验检测细胞活力。结果发现,MT对T和B淋巴细胞生长均具有显著抑制作用。当分别用含浓度为1.0、5.0和10.0 μg/mL WPE和MT共培养细胞结果发现,T和B淋巴细胞活力得到显著提高,当WPE的作用浓度为1μg/mL时,呈现出显著的缓解作用,当作用浓度为10μg/mL时,细胞活力可恢复至正常对照组水平。(3)WPE缓解MT对脾淋巴细胞的氧化毒性作用。MT与脾淋巴细胞共培养48 h后,检测细胞内活性氧和抗氧化因子水平。结果显示,MT使脾淋巴细胞产生的活性氧含量升高,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷氨酰半胱氨酸连接酶和谷胱甘肽S转移酶的水平降低。当用1.0、5.0和10.0 μg/mL浓度的WPE分别与MT共处理脾淋巴细胞,结果发现WPE以浓度依赖的方式降低活性氧含量,提高抗氧化因子的水平。当WPE作用浓度为10.0μg/mL时,细胞的氧化还原状态可恢复至接近正常对照组水平。(4)WPE缓解MT对脾淋巴细胞氧化毒性机制研究。MT与脾淋巴细胞共培养48 h后,通过酶联免疫吸附实验检测线粒体呼吸链复合体的活力。结果显示MT抑制复合体Ⅰ和复合体Ⅱ的水平而提高复合体Ⅲ活力。当WPE的浓度为10.0 μg/mL时,能够显著上调复合体Ⅰ和Ⅱ的水平,并使复合体Ⅰ的水平恢复至接近正常对照组。以上研究结果表明,MT通过对脾淋巴细胞诱导产生氧化毒性而干扰其增殖功能,WPE通过恢复线粒体呼吸链复合体Ⅰ和Ⅱ的水平减少活性氧产生,通过提高抗氧化因子水平恢复抗氧化防御系统,进而有效缓解农药MT诱导的氧化应激,对脾淋巴细胞起到保护作用。