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虫草素(cordycepin)是蛹虫草中主要活性成分,具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用。栽培过蛹虫草的固体培养基中含有丰富的菌丝体,但这些固体培养基常做废料处理,造成很大的浪费。本文利用大孔树脂柱层析法从蛹虫草[Cordycepsmilitaris(L.) Link]废弃培养基中分离纯化虫草素,并用纯化后的虫草素处理人肺癌A549细胞,研究其对肿瘤细胞的抑制作用,具体研究结果如下:
1采用正交试验设计获得虫草素的最佳热水浸提条件,即浸提温度70℃,浸提时间8h,料液比1∶20(W/V),对虫草素进行粗提。根据5种大孔树脂对虫草素的吸附和解吸附能力对其进行了筛选,结果表明XAD16树脂对虫草素静态吸附能力和解吸附能力最好,在pH9.0的条件下,以50%的乙醇作为洗脱剂时其洗脱效果最好;利用聚酰胺树脂精制虫草素,经由以上步骤提取的虫草素纯度达到了98%以上。
2将纯化后的虫草素作用于人肺癌A549细胞。利用MTT法检测虫草素对细胞相对活力的影响;用Hochest33258荧光染色观察细胞核形态的变化;检测不同处理组中细胞内caspases的活力。结果显示,虫草素能有效抑制人肺癌A549细胞的活力,引起细胞核凝缩甚至破碎,诱导其发生凋亡。