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心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)是指心肌间质中心脏成纤维细胞增殖和细胞外基质过度沉积的病理过程,这种病理变化在多种心血管疾病中普遍存在,可导致心肌组织结构破坏和功能紊乱,甚至引起心源性猝死。心肌纤维化的严重程度和心血管疾病的发展及预后密切相关,但是目前尚缺乏有效的防治手段。因此,深入研究心肌纤维化的发病机制并寻找治疗靶点是国内外研究的热点问题。民族药物学调查结果显示,内蒙古地区的居民有饮用尖叶假龙胆(Gentianella acuta(Michx.)Hulten,Gentianella acuta)茶的习惯,认为对心脏有益,但是目前尚缺乏相关的文献报道。本实验利用异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)建立大鼠心肌纤维化模型,观察尖叶假龙胆对大鼠心肌纤维化的影响,并从分子水平及基因水平进一步探讨其抗心肌纤维化的作用机制,旨在为尖叶假龙胆用于防治心肌纤维化提供实验和理论依据。目的:本研究利用ISO诱导的心肌纤维化动物模型,通过检测心肌细胞内抗氧化防御能力、心功能及心肌组织病理学变化,观察尖叶假龙胆对心肌纤维化的影响。通过免疫组化与分子生物学技术检测核转录因子(nuclear factor-p65,NF-κB-p65)、转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达水平等指标变化,探讨尖叶假龙胆抑制心肌纤维化的抗炎和抗氧化的机制。方法:SPF级雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成5组(n=8),分别是:正常对照组、模型组(ISO)、高剂量药物干预组(ISO+1.2g/kg Gentianella acuta)、中剂量药物干预组(ISO+0.6g/kg Gentianella acuta)、低剂量药物干预组(ISO+0.3g/kg Gentianella acuta)。模型组连续7天皮下注射ISO(5mg/kg,1/日),建立心肌纤维化动物模型。干预组从造模第二天开始给予不同剂量浓度(1.2,0.6,0.3g/kg)的尖叶假龙胆灌胃治疗,每日一次,持续21天。实验过程中,每周记录每只大鼠的体重和心电图。于实验第22天禁食水12h后称重,麻醉后行血流动力学检测,随后处死大鼠,分离心脏并称重,取左心室行生化及组织病理学检查,并用免疫组化、蛋白印迹、PCR等方法,检测各组的NF-κB-p65、TGF-β1和CTGF表达水平的变化。结果:1尖叶假龙胆对体重和心脏质量指数的影响与正常对照组相比(325.71±9.21g,2.74±0.04mg/g,1.81±0.02mg/g),模型组大鼠的体重(BW)降低(282.36±8.14g),心重指数(CWI)和左心室重指数(LVWI)升高(2.97±0.03mg/g,2.15±0.03mg/g)。与模型组相比,三种不同剂量浓度的尖叶假龙胆均可使大鼠体重增加,心重指数和左心室重指数明显下降(P<0.05)。2尖叶假龙胆对心电图波形的影响与正常对照组相比,模型组可见高大T波、ST段抬高、R波降低,尖叶假龙胆干预组的心电图基本接近正常。3尖叶假龙胆对心功能的影响与正常对照组相比,模型组左心室舒张末期压(LVEDP)和心率(HR)明显升高,左心室压最大上升速率(LVSP)和左心室压最大上升/下降速率(±d P/dt max)降低。与模型组相比,三种不同剂量浓度的尖叶假龙胆组LVEDP和心率明显下降,LVSP和±d P/dt max明显升高(P<0.05)。4尖叶假龙胆对抗氧化防御的影响与正常对照组相比(6.79±0.36nmol/mg.prot,12.21±0.42U/mg.prot,4.76±0.25 mg/L),模型组的丙二醛(MDA)含量(11.28±0.31 nmol/mg.prot)明显增加,超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平(6.84±0.29 U/mg.prot,2.43±0.14 mg/L)明显降低。与模型组相比,尖叶假龙胆干预组使MDA含量降低,SOD和GSH水平增加(P<0.01)。5尖叶假龙胆对胶原含量的影响与正常对照组相比(0.38±0.02ug/mg),模型组羟脯氨酸(Hydroxyproline)含量明显增加(0.92±0.03ug/mg)。与模型组相比,高、中、低三种不同剂量的尖叶假龙胆干预组(0.58±0.02ug/mg,0.43±0.01ug/mg,0.43±0.02ug/mg)中羟脯氨酸含量均明显降低(P<0.01),分别下降了36.96%,53.26%,53.26%。6尖叶假龙胆对病理学变化的影响与正常对照组相比,异丙肾上腺素诱导严重的心肌组织结构改变,包括广泛纤维化和炎细胞浸润。三种不同剂量浓度的尖叶假龙胆干预组的纤维化和炎性细胞浸润程度较轻。7尖叶假龙胆对心肌纤维化程度的影响模型组出现明显的心肌纤维化改变。与模型组比较,三种不同剂量浓度的尖叶假龙胆干预组纤维化程度均明显减轻。8尖叶假龙胆对NF-κB-p65、TGF-β1和CTGF蛋白表达的影响正常对照组NF-κB-p65、TGF-β1和CTGF含量较少,模型组蛋白表达明显增加,而三种不同剂量浓度的尖叶假龙胆均使NF-κB、TGF-β1和CTGF的表达明显下降。9尖叶假龙胆对TGF-β1和CTGF m RNA表达的影响与正常对照组相比(1.16±0.17,1.13±0.17),模型组TGF-β1和CTGF表达(4.25±0.23,3.86±0.31)增加。而三种不同剂量浓度的尖叶假龙胆均可逆转TGF-β1和CTGF m RNA表达的上调(P<0.01)。结论:尖叶假龙胆可以逆转异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化,机制可能与通过抑制心肌NF-κB-p65,随后使TGF-β1和CTGF表达下调有关。