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新城疫是由副粘病毒科的新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一种禽类烈性致死性传染病，是危害我国畜牧业的4大A类病之一，目前我国对该病的控制主要靠常规疫苗的免疫接种，但常规疫苗的免疫接种常常引起免疫失败，同时又干扰该病的流行病学监测，为了克服常规疫苗的这些缺点，在早期工作中，本实验室构建了表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒rFPVLP-HN，经动物实验证实了该重组病毒免疫SPF鸡后能够完全抵抗NDV强毒的致死性攻击，然而免疫含有母源抗体的商品鸡商品鸡后只能提供部分免疫保护，基于此，本研究用毒力相对较强的鸡痘病毒FPV282E4作亲本病毒，通过同源重组方法将HN基因插入FPV282E4中，构建了能够正确表达HN基因的重组鸡痘病毒rFPV282E4-HN，并对其遗传稳定性和免疫效力进行评估。 首先，从质粒GEMHN上切下完整的HN基因后，插入到质粒pFG1175-1的FPV基因组复制非必须区片段，使HN基因置于启动子P7.5下游，获得转移载体pFGHN1175-1，用以转染预先感染FPV282E4的CEF，经含有X-gal的营养琼脂覆盖后挑选蓝斑，多次克隆纯化后获得纯化的重组鸡痘病毒(rFPV282E4-HN)，以PCR方法确定HN基因成功插入到FPV282E4内和间接免疫荧光试验证实了rFPV282E4-HN能够正确表达HN蛋白。 将rFPV282E4-HN在CEF上连续传20代后，用PCR方法扩增出原代、10代、20代的重组病毒的HN基因。测序结果发现10代和20代HN基因仅有1个碱基发生变异，氨基酸序列没有变异。应用转瓶分别培养了三个代次的重组病毒，结果显示各个代次的重组病毒的产量没有发生明显的变化，IFA证实了三个代次的重组病毒均能正确表达HN蛋白，进一步表明了rFPV282E4-HN具有较好的遗传稳定性。扬州大学硕士学位论文 10日龄sPF鸡随机分为四组，分别于颈部皮下接种rFPv282E4一HN（105PFu/羽）、rFPvLP一HN（一o5PFuz羽）、NDv油乳剂灭活苗（o.ZmF只）wt一FPv（lo5PFuz羽）于免疫后7、12、16、21日龄分别采血;分离血清;作HI抗体检测，结果发现:FPv282E4一HN和、rFPvLP一HN免疫组诱生的Hl抗体效价均低于ND油苗免疫组的扭抗体效价，但免疫鸡均能够完全抵抗NDV强毒的致死性攻击。 用含有残余抗NDV母源抗体的30日龄商品蛋鸡进行免疫效力实验，结果发现，由于母源抗体的干扰，rFPV282E4HN和、:FPVLPHN在商品鸡体内诱生的Hl抗体效价明显低于ND油苗组的Hl抗体效价，免疫21天后用剂量为105EID刘羽的NDV强毒滴鼻攻毒，结果发现wt一FPV免疫组和空白对照组的实验鸡全部死亡，ND油苗、rFPV282E4-HN和rFPVLPHN的免疫组的免疫保护率分别为100%、80%、68%。对SPF鸡和商品鸡实验周期内的体重进行分析，结果表明两种不同毒力的重组鸡痘病毒对SPF鸡和商品鸡的生长没有明显的影响 综上所述，表达NDVI硕N基因的重组鸡痘疫苗有良好的遗传稳定性，在SPF鸡上能对NDV强毒的攻击提供100%的保护，但在商品鸡母源抗体的干扰仍是一个巫待解决的问题。