铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa）是临床上常见的革兰氏阴性病原菌,在自然界中分布广泛,主要引起免疫力低下人群的急慢性感染。抗生素是临床上治疗细菌引起的传染病的主要方法,而铜绿假单胞菌具有较强的耐药性,因此其感染难以治愈且容易出现反复性感染。铜绿假单胞菌主要有三种耐药性机制,分别为固有性耐药机制,获得性耐药机制和适应性耐药机制。值得注意的是,当细菌受到致死剂量的杀菌抗生素杀伤时,大部分细菌会死亡而一小部分细菌会形成休眠的持留细胞得以存活。我们在实验中发现柠檬酸合酶基因gltA的缺陷会导致细菌对多种抗生素产生耐受性。同时我们发现gltA缺失菌株对抗生素耐受性的改变可能与其抗生素进入效率细胞下降和膜通透性下降相关。gltA缺失会导致细菌缺失合成谷氨酸的骨架。在培养基中补加谷氨酸使gltA缺失菌株的生长和抗生素的耐受性回复,推测gltA缺失菌株中严谨反应被激活。在铜绿假单胞菌中RelA和SpoT通过控制ppGpp的胞内平衡调控严谨反应,且严谨反应已被证明会影响铜绿假单胞菌持留菌的形成。我们通过检测sodB,rpoS和relA的表达量和对H2O2的耐受性,基本确定gltA缺失菌株中严谨反应被激活,且在gltA缺失菌株中敲除relA能回复其抗生素敏感性。铜绿假单胞菌通过分泌毒力因子感染宿主细胞,其中Ⅲ型分泌系统（Type III secretion system,T3SS）是重要的毒力因子之一。T3SS基因的表达由主调节子ExsA调节。exsA基因位于exsC-exsE-exsB-exsA操纵子的末端。exsA的转录受其上游紧邻的exsA启动子(PexsA)和远端的exsC启动子(PexsC)驱动,这两个启动子分别受cAMP-Vfr和ExsA调节。我们在实验中发现柠檬酸合酶基因gltA的缺陷会导致细菌的Ⅲ型分泌系统基因表达和细胞毒性上升。补加谷氨酸或敲除rel A都可以使gltA缺失菌株Ⅲ型分泌系统基因的表达和细胞毒性得到回复。同时我们发现gltA的缺陷导致Ⅲ型分泌系统基因上调是受cAMP-Vfr系统调控的,且胞内cAMP浓度的上升与严谨反应的激活相关。综上所述,在本研究中,我们证明了柠檬酸合酶基因gltA的缺陷会通过激活严谨反应而增加细菌的Ⅲ型分泌系统基因的表达和抗生素耐受性。