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目的研究胃动蛋白2（GKN2）高表达对CD44（+）SGC7901胃癌干细胞（Gastric cancer stem cells,GCSCs）的增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响,及对SHH（Sonic Hedgehog）蛋白表达的调控作用,初步阐明GKN2对胃癌干细胞的抑制作用,为临床设计有效医治胃癌的策略提供理论依据。方法1、采用免疫磁珠分选技术（MACS）从人胃癌细胞SGC7901中分选CD44（+）SGC7901细胞,免疫荧光检测阳性效率;将构建好的高表达GKN2的腺病毒载体转染GCSCs,Western Blot验证转染是否成功。2、运用肿瘤克隆球形成实验、CCK8实验、流式细胞术、Transwell迁移及侵袭实验等方法,观察GKN2高表达对人GCSCs增殖、细胞周期、凋亡、迁移及侵袭的影响。3、Western Blot检测GKN2高表达对SGC7901细胞及GCSCs中SHH蛋白表达的调控作用。结果1、免疫荧光结果显示CD44阳性细胞的细胞膜表面表达绿色荧光;经免疫磁珠分选后的细胞,CD44（+）细胞数目显著增加,证明成功从SGC7901细胞中富集获得GCSCs。2、GKN2高表达腺病毒载体转染GCSCs后,荧光结果表明阳性细胞率为80%,Western Blot结果同样发现GKN2转染组中GKN2的表达明显增加,说明成功获得高表达GKN2的GCSCs。3、肿瘤克隆球形成实验结果显示,GKN2高表达组的GCSCs,形成克隆球的数目（9.1±3.59）明显低于未转染组（30.7±3.13）及空载体组（25.8±3.47）（P<0.05）,且成球直径较小、透光度较高,说明GKN2高表达能抑制GCSCs形成肿瘤克隆球的能力。4、CCK8实验结果显示,在转染GKN2高表达腺病毒载体48h、72h、96h后,GCSCs的OD450值均低于未转染组及空载体组（P<0.05）,且抑制率随时间逐渐增加,说明GKN2高表达具有抑制GCSCs增殖的作用。5、Transwell迁移实验结果发现,GKN2高表达组迁移细胞数（31±4.6）,明显低于未转染组（198±9.8）及空载体组（172±8.4）;Transwell侵袭实验结果显示,GKN2高表达组穿过基质胶侵袭至下室的细胞数（14±2.7）,明显低于未转染组（155±9.9）及空载体组（131±8.4）。说明GKN2能显著抑制GCSCs的迁移及侵袭能力。6、流式细胞术结果显示,转染前后GCSCs的细胞周期未有明显改变;流式细胞术也显示,GKN2高表达组凋亡率（32.90%）明显高于未转染组（18.65%）及空载体组（19.24%）（P<0.05）,这说明GKN2高表达能促进GCSCs的凋亡。7、Western Blot结果显示,GCSCs中SHH蛋白的表达高于SGC7901中SHH的表达,且两种细胞系在GKN2高表达之后SHH的表达量均明显降低。结论GKN2高表达能抑制GCSCs的增殖、迁移侵袭并诱导凋亡,其作用可能与下调SHH蛋白表达有关。