在昆虫病原真菌中,以罗伯茨绿僵菌为主的杀虫剂具有安全,无污染等特点,在害虫生物防治中占有重要地位。但是该类杀虫剂也存在不足,例如杀虫速度慢,易受环境影响,成本较高等。因此深入研究罗伯茨绿僵菌的致病和抗逆机制,选育高效杀虫菌株是迫切需求的必要途径。酮醇酸还原异构酶(ketol acid reductoisomerase,KARI)是生物体内合成支链氨基酸的关键酶之一,存在于植物,真菌,细菌和古细菌中,与真菌的生长发育、致病力、抵御不利条件有着密切的关系。所以,在生物体中酮醇酸还原异构酶(KARI)有着不容忽视的重要作用。本文以罗伯茨绿僵菌为研究对象,采用基因敲除技术和农杆菌介导遗传转化技术,获得MrilvC敲除株和回补株,并对野生株、敲除株和回补株进行相关的生物学性状研究。具体研究结果如下:a)菌落形态和生长速率:与野生型相比,在SDAY,1/4SDAY培养基中,敲除株菌落生长直径分别减少了 10%,28%,颜色变浅,呈淡黄色;在PDA培养基中,敲除株孢子不能正常生长萌发,但敲除株的菌丝可以生长,生长速率明显缓慢,只能看到稀疏的白色菌丝。b)产孢量:与野生型相比,MrilvC敲除株的产孢量有明显的下降趋势,下降了 90%左右。c)化学药品耐受:在刚果红、SDS、甲萘醌、H2O2抗逆环境中,敲除株与野生型相比,相对抑制率分别提高了 36.25%,44.84%,34.69%和94.15%。d)紫外辐射和热胁迫耐受:与野生型相比,敲除株孢子的萌发率分别减少了 73.18%,51.49%。MrilvC敲除株分生孢子的存活率为50%左右。e)毒力:与野生型相比,MrilvC敲除株的毒力几乎丧失。用Fluorescent Brightener 28染料对大蜡螟体表和体内进行染色发现,在大蜡螟体表和体内,MrilvC敲除株的孢子没有萌发。此外在研究中还发现,敲除株孢子在外源添加支链氨基酸(Val、Leu、Ile)的培养基中依旧不能恢复萌发,但可以在SDAY培养基中萌发。通过HPLC-MS检测SDAY培养基成分时,发现该培养基中含有两种合成支链氨基酸的中间产物(2,3-二羟基-3-甲基戊酸DHMV,2,3-二羟基异戊酸DHIV),我们推测这两个中间产物可能通过其他途径促进孢子萌发。综上所述,酮醇酸还原异构酶ilvC基因的缺失对罗伯茨绿僵菌的生长发育和抗化学胁迫、紫外、产孢以及毒力均有明显影响,特别是对孢子萌发起到重要作用。