贝伐珠单抗是一种单克隆抗体,在肿瘤和黄斑变性的治疗中发挥着重要作用,具有很高的医学价值和广阔的市场应用前景。本课题组已经构建并筛选出一株稳定表达贝伐珠单抗的重组中国仓鼠卵巢（recombinant Chinese hamster ovary,r CHO）细胞,本文计划对该细胞株进行细胞培养工艺研究,并对该细胞株培养过程存在的问题进行研究和探讨。首先通过单因素实验初步筛选出适合该重组CHO细胞的5个培养参数,包括初始活细胞密度（initial viable cell density,IVCD）、基础培养基、培养温度、变温活细胞密度（shift VCD）和补料培养基,结果显示基础培养基存在乳酸累积现象,因此进一步通过调整补料方式和添加铜离子对乳酸代谢进行调控,最终确定当铜离子添加浓度为120μg/L,补料策略为d3～d14补料量维持第二天残糖水平为2 g/L最有利于细胞生长代谢和抗体产物表达。此外,本文采用实验设计（全因子设计和中心复合设计）和响应面分析的方法,优化了重组贝伐珠单抗的细胞培养工艺,对最佳工艺参数进行验证,得到最佳参数组合:初始活细胞密度0.9±0.1×10⁶ cells/m L、变温活细胞密度20±2×10⁶ cells/m L、BM04占比75%、Cu SO₄?5H₂O添加浓度为140μg/L、培养时间14天,并对实验过程中抗体浓度及抗体电荷异质性的检测方法进行了方法学验证。本研究的最后初步探索了金属离子(Cu²⁺/Mn²⁺)和岩藻糖（Fucose）对该细胞株表达抗体糖基化的影响,实验结果表明铜离子和锰离子对细胞抗体G0和Afucosylated糖型的合成具有协同作用,但高浓度铜离子会抑制细胞产生抗体,导致抗体浓度降低。本文对该重组贝伐珠单抗细胞的培养工艺进行了初步研究,通过调整补料方式、铜离子添加浓度对乳酸代谢进行调控,提高了细胞培养过程的耐受性。虽然对细胞抗体糖基化的研究不够深入,但本文所得结论对同类细胞摇瓶培养工艺开发或研究具有重要的参考价值,也为反应器工艺放大及规模化生产提供研究思路和基础数据。